薄层色谱法对宫衣净酊成分的定性鉴别

来源 :安徽农业科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zyfscu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  摘要[目的]建立治疗奶牛胎衣不下的中兽药宫衣净酊的质量标准。[方法]采用薄层色谱(TLC)法对该酊剂中的中药材进行定性鉴别,确定该酊剂中葛根、红花、急性子和川牛膝的薄层鉴别方法。[结果]在选定的色谱条件下,色谱斑点分离较好,该鉴别方法能够有效鉴别葛根、红花和急性子。[结论]该试验中所建立的TLC方法简单、易操作、专一性强、重复性好,可为宫衣酊剂的质量控制提供依据。
  关键词宫衣净酊;薄层色谱法;质量标准
  中图分类号S853.7文献标识码A文章编号0517-6611(2016)27-0114-03
  Abstract[Objective] To establish quality standards of Gongyijing tincture to cure retained fetal membranes. [Method] Thin layer chromatography (TLC) method was used for qualitative identification of the traditional Chinese medicine in Gongyijing tincture. Puerarin, safflower and garden balsam seed and Radix Cyathulae were identified by TLC in Gongyijing tincture. [Result] Under the selected chromatographic conditions, chromatographic spots were better separated. This identification method could effectively identify puerarin, safflower, and garden balsam seed. [Conclusion] The established TLC method was simple, easy to operate, has strong specificity and good repeatability, which provides references for the quality control of Gongyijing tincture.
  Key wordsGongyijing tincture; Thin layer chromatography (TLC); Quality standard
  近年来,随着畜禽养殖的规模化和集约化发展,抗菌药物被广泛应用于畜牧生产中,由于抗生素的不合理使用,由此带来的细菌耐药性、动物卫生安全问题及畜禽产品质量安全引起了全社会的广泛关注[1-2]。中兽药由于其独特的药理学作用,且具有低毒、低残留和不产生耐药性等优点,在抗菌抗病毒的同时,还能促进动物生长,提高机体免疫力,在动物疾病的预防、治疗和保健领域得到了广泛应用[3-4]。宫衣净酊是由葛根、急性子、红花、川牛膝等中药组成,是采用中兽医群体辩证的观点,通过药材加减并经过临床的疗效试验后研制而成、采用渗漉的方法制备而成的酊剂,其临床功效主要包括活血化瘀、促进胎衣排出、净化子宫、加快产后子宫复旧、促进产后繁殖性能的恢复[5]。谢家声等[6]研究表明宫衣净酊具有治疗奶牛胎衣不下的效果,治愈率为857%。
  薄层色谱法(TLC)是一种最简单的色谱分离技术,因其具有操作简单、分离效率高、设备简单、专属性强、分析快速等特点,被广泛应用于药物分析中,特别是复方制剂的质量标准的鉴定,因此对该复方酊剂进行薄层鉴别可以为其提供质量控制依据[7-9]。
  为了有效控制宫衣净酊中葛根、急性子和红花的质量,保证其临床中的疗效,笔者采用薄层色谱法对宫衣净酊中葛根、急性子、红花和川牛膝进行定性鉴别。
  1材料与方法
  1.1材料
  1.1.1仪器。
  赛多利斯分析天平(ALC110.4);电子调温电热套(天津市泰斯特仪器公司);超声波清洗仪(型号KQ250,为上海昆山超声波仪器公司产品);旋转蒸发仪(EYELA,为上海爱朗仪器公司产品);电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9240A);全自动薄层色谱点样仪(型号SP-20E,为上海科哲生化科技有限公司产品)。
  1.1.2药品与试剂。
  宫衣净酊样品,由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中兽医研究室研制,200 mL/瓶;葛根药材、红花药材、急性子药材、川牛膝药材,均购自兰州黄河药材市场;葛根素标准品(批号110752-201313,由中国食品药品鉴定研究院提供);急性子对照药材(批号121628-201001,由中国食品药品鉴定研究院提供);红花对照药材(批号120907-201111,由中国食品药品鉴定研究院提供);杯苋甾酮标准品(批号111804-201303)。硅胶G板和H板(10 cm×20 cm),均购自青岛海洋化工有限公司;其余试剂均为分析纯;超纯水。
  1.2方法
  1.2.1急性子的薄层鉴别。
  取宫衣净酊溶液 10 mL,蒸干,用 5 mL 纯化水充分溶解,用 10 mL 石油醚(60~90 ℃)萃取1次,弃去石油醚层,水层分别用20、20、10 mL水饱和正丁醇萃取 3 次,合并正丁醇层液体,蒸干,用 2 mL 80%丙酮溶解,作为供试样品溶液。按照处方称取除急性子以外的药材,配制阴性对照溶液。称取急性子对照药材 4.0 g,加热回流 1 h,弃去丙酮液,药渣挥干,加入水饱和正丁醇 40 mL,超声处理 30 min,过滤,将滤液蒸干,在残渣中加入甲醇 2 mL使其溶解,作为对照药材溶液。吸取上述3种溶液各 2 μL,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(100∶05)为展开剂,展开,取出,晾干,置于紫外灯(波长365 nm)下检视。供试品色谱中,应在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的荧光斑点[6]。   1.2.2红花的薄层鉴别。
  取宫衣净酊溶液 10 mL,蒸干,用 5 mL 纯化水充分溶解,用 10 mL 石油醚(60~90 ℃)萃取1次,弃去石油醚层,水层分别用20、20、10 mL水饱和正丁醇萃取 3 次,合并正丁醇层液体,蒸干,用 2 mL 80%丙酮溶解,作为供试样品溶液。按照处方称取除红花外的药材,配制阴性对照溶液。称取红花药材粉末 0.5 g,加入80%丙酮溶液 5 mL,密塞,振摇 15 min,静置,取上清液作为供试品溶液。另外称取红花对照药材 0.5 g,按照相同方法制成对照药材溶液。吸取上述样品2 μL,分别点于同一硅胶 H 薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7∶2∶3∶0.4)为展开剂,展开,取出,晾干。供试品色谱中,应在于对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的荧光斑点。
  1.2.3葛根的薄层鉴别。
  取宫衣净酊溶液 10 mL,蒸至无醇味,加入纯化水稀释,用 20 mL 三氯甲烷萃取,弃去三氯甲烷层,水层液体用20、20、10 mL水饱和正丁醇萃取 3 次,取正丁醇液蒸干,用纯甲醇溶解至 2 mL,作为供试品溶液。按照处方取除葛根外的所有药材,配制阴性对照溶液。称取葛根对照药材粉末 0.8 g,加入甲醇 10 mL,放置 2 h,过滤,滤液蒸干,在残渣中加入甲醇 1 mL 使其溶解,作为对照药材溶液。取葛根素对照品,加入甲醇制成1 mg/mL的溶液,作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各 2 μL,其他样品溶液各 1 μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(7∶2.5∶0.25)为展开剂,展开,取出,晾干,置于紫外光灯(波长365 nm)下检视。供试品色谱中,应在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的荧光斑点。
  1.2.4川牛膝的薄层鉴定。
  取“宫衣净酊”样品溶液 20 mL,浓缩至约 2 mL,添加于中性氧化铝柱(100~200 目,2.0 g,内径 15 mm)上,用甲醇-乙酸乙酯(1∶1)40 mL 洗脱,收集洗脱液,蒸干,在残渣中加入甲醇 2 mL使其溶解,作为供试品。按照处方称取除葛根外的药材,配制阴性对照溶液。另取川牛膝对照药材 2 g,按照相同方法制成对照药材溶液。再取杯苋甾酮对照品,加入甲醇制成0.5 mg/mL的溶液,作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各 2 μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(10∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷上 10%硫酸乙醇溶液,105 ℃下加热至斑点显色清晰,置于紫外灯(波长365 nm)下检视。供试品色谱中,应在与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的荧光斑点。
  2结果与分析
  2.1急性子的薄层鉴别
  从图1可以看出,3批供试品宫衣净酊色谱中,在与急性子对照药材色谱的相应位置上显示相同颜色的荧光斑点,缺急性子的阴性对照在相同位置上无相应的斑点,说明阴性对照无干扰,薄层色谱法对急性子的鉴定具有专一性。
  2.2红花的薄层鉴别
  从图2可以看出,3批供试品宫衣净酊色谱中,在与红花药材和红花对照药材色谱的相应位置上显示相同颜色的荧光斑点,缺红花的阴性对照在相同位置上无相应斑点,说明阴性对照无干扰,薄层色谱法对红花的鉴定具有专一性。
  2.3葛根的薄层鉴别
  从图3可以看出,3批供试品宫衣净酊色谱中,在与葛根素标准品和葛根对照药材色谱的相应位置上显示相同颜色的荧光斑点,缺葛根的阴性对照在相同位置上无相应的斑点,说明阴性对照无干扰,薄层色谱法对葛根的鉴定具有专一性。
  2.4川牛膝的薄层鉴别
  从图4可以看出,3批供试品宫衣净酊色谱中,在与杯苋甾酮标准品和川牛膝对照药材色谱的相应位置上显示相同颜色的荧光斑点,缺川牛膝的阴性对照在相同位置上无相应的斑点,说明阴性对照无干扰,薄层色谱法对川牛膝的鉴定具有专一性。
  3讨论与结论
  酊剂是药物用规定浓度乙醇提取或溶解制成的澄明液体制剂,也可用流浸膏稀释制成。一般药材制成浓度20 g/mL,含剧毒药物10 g/mL。酊剂具有杂质含量少、药量高、服用剂量少、制备简单、易保存、不易变质的特点[10]。宫衣净酊以补气益血、行滞祛瘀、利水消肿的红花、葛根、急性子、川牛膝为主药。该组方中红花具有活血通经、祛瘀止痛、抗菌消炎、解热镇痛等功效,且对子宫具有兴奋作用,小剂量使用可使子宫发生节律性收缩,大剂量使用则使其收缩加强[11];红花对妊娠动物的作用尤为明显[12]。葛根具有解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻等功效,且具有抗氧化损伤、抗细胞凋亡的作用[13]。急性子具有消积、破血、软尖、抗菌、抗氧化等功效[10],且具有兴奋子宫平滑肌、加强子宫收缩的作用[14]。川牛膝具有活血祛瘀、利尿通淋、引血下行等功效[15] 。通过结合以上4种中药材的药理特性、配伍关系及酊剂的特点,该中药酊剂可用于治疗奶牛胎衣不下,且临床效果显著。
  笔者参照《中国兽药典》中对红花、葛根、急性子、川牛膝4味药材的鉴别方法,通过对照品、供试品、阴性样品色谱的比较试验,确定了宫衣净酊中4味药材的薄层鉴别方法。这4种方法专属性强,制备简单,检测快速,样品与对照品相应
  的位置上显示相同的斑点,阴性对照无干扰,可作为宫衣净酊中急性子、红花、葛根和川牛膝的定性鉴别方法。在葛根的鉴别中,《中国兽药典》2010年版(2部)葛根的薄层鉴定方法,结果发现斑点分离不明显;结合《中国药典》2010年版(1部)中当归拈痛丸中的处理方法,结果显示斑点清晰,说明薄层色谱方法对葛根的鉴定具有专一性。在红花的鉴别中,参照《中国兽药典》2010年版(1部)红花的薄层鉴定方法,结果发现相应的点分离较差,且其他成分干扰较严重;结合《中国药典》2010年版(1部)中化积口服液中红花的处理方法,结果显示斑点清晰,说明薄层色谱方法对红花的鉴别具有专一性。在急性子的鉴别中,参照《中国兽药典》中急性子的鉴别方法试验,效果不明显;参照红花的鉴别方法,发现能分离对应斑点,但分离不彻底,后对急性子的不同展开液进行优化,发现采用三氯甲烷-甲醇(100∶0.5)为展开剂比三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(100∶0.5)[10]为展开剂的分离效果更好。在川牛膝的鉴别中,参照《中国兽药典》2010年版(2部)川牛膝的薄层鉴定方法,结果显示斑点清晰,说明薄层色谱方法对川牛膝的鉴别具有专一性。   宫衣酊剂为活血化瘀、促进产后子宫的复旧、提高产后繁殖性能的新兽药产品,为了保证其临床疗效,应建立质量标准,以保证该酊剂的质量。该研究中采用的TLC法可以对宫衣净酊进行薄层鉴别,且方法简单,专一性较强,可以达到控制宫衣净酊质量的目的。
  参考文献
  [1] 陈一资,胡滨.动物性食品中兽药残留的危害及其原因分析[J].食品与生物技术学报,2009,28(2):162-166.
  [2] 王兰.抗生素污染现状及对环境微生态的影响[J].药物生物技术,2006,13(2):144-148.
  [3] 杨志强,李建喜,王学智.中兽药研究新进展和新技术[J].兽医导刊,2007(9):33-35.
  [4] 李双亮,崔保安,张红英.中药在兽医临床中应用的研究进展[J].中国畜牧兽医,2009(1):94-96.
  [5] 崔东安,王学智,王旭荣,等.正交试验法优选宫衣净酊渗漉提取工艺研究[J].中国兽药杂志,2013,47(11):50-53.
  [6] 谢家声,杨锐乐,李世宏,等.宫衣净酊剂及宫衣净 Ⅱ 号合剂防治奶牛胎衣不下效果观察 [J] .中兽医学杂志,2008(增刊):47-49.
  [7] 吕长淮.薄层色谱法在药物分析中的应用进展[J].中国药房,2006,17(22):1748-1749.
  [8] 任丽花,辛蕊华,程龙,等.金根芩连散的质量标准研究[J].中国畜牧兽医,2014,41(8):169-172.
  [9] 许春燕,刘希望,杨亚军,等.银翘蓝芩口服液薄层色谱鉴别方法研究[J].动物医学进展,2015(11):40-43.
  [10] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典[S].北京:中国农业出版社,2010:453.
  [11] 董玉睿.浅谈西红花的药理研究概况[J].天津中医学院学报,2000,19(2):53-55.
  [12] 高其铭.中药红花的药理研究概况[J].中西医结合杂志,1984,4(12):758.
  [13] 楚纪明,马树运,李海峰,等.葛根有效成分及其药理作用研究进展[J].食品与药品,2015,17(2):142-146.
  [14] 李琼阁,胡敦梅,丁玉峰.中药急性子化学成分及药理作用的研究进展[J].中国药师,2012,15(2):262-264.
  [15] 赵兴梅,徐光忠,李建利,等.川牛膝和怀牛膝的现代药理研究概况[J].华西药学杂志,2004,19(3):205-207.
其他文献
摘要显齿蛇葡萄为药食两用植物,具有疏风解毒、祛瘀消肿、止血止痛功效,对显齿蛇葡萄的化学成分(黄酮类、酚类、甾体类、多糖类、挥发油类等)、药理作用及其机制(抗氧化、抑菌、抗炎镇痛、抗癌、抗病毒等)进行综述,以期为其临床应用及全面开发利用提供依据。  关键词显齿蛇葡萄;化学成分;药理作用  中图分类号R284文献标识码A文章编号0517-6611(2016)27-0135-04  AbstractAm
期刊
摘要利用1950~1988、2005~2015年湘西州森林火灾相关资料,1960~2015年湘西州8县(市)气象观测站温度、湿度资料,采用线性和曼-肯德尔(MK)突变检验的分析方法,对湘西州森林防火与气象条件关系进行研究。通过研究得出气象条件和森林火灾关系非常紧密,每年的春冬季节是森林火灾的高发期;确定森林火险预报模型为I=D×4+(100-H)×0.4+T+F+r,将森林火险等级划分为五级;对湘
期刊
摘要[目的]筛选适宜华山林场种植的优良种源,为邓恩桉良种选育提供基础依据。[方法]连续5年对华山林场10个邓恩桉种源的保存率和生长性状进行观测和分析。[结果]随林龄增加,种源平均保存率和平均胸径的增加幅度呈下降趋势,平均树高、平均单株材积的增长幅度呈上升趋势;受2013年风雪灾害影响,种源平均保存率在2.5~ 3.5年间下降幅度最大;4.5年时保存率和胸径最高为D9509,树高和单株材积最大为D9
期刊
摘要将使用后评价(POE)方法引入园区景观更新中,目的是想通过问卷调查的方式获得项目建成后各项运作的第一手资料,并通过对所得到信息和数据的整理,得出使用状况评价分析报告,全面鉴定项目景观更新在多大程度上满足了使用群体的需要。通过与前面所述景观更新信息的比较,找出园区景观更新的成功与不足之处,为该园区景观的进一步完善提供参考,同时也为将来其他创意产业园景观更新提供可靠的理论与实践指导。  关键词使用
期刊
摘要通过星地同步地面试验,建立起洞庭湖水体的叶绿素a浓度遥感反演模型,运用2011年4月~2012年4月的多期环境一号卫星CCD数据,对洞庭湖叶绿素a浓度进行动态监测和分析。结果表明:环境一号卫星CCD数据第三通道(HJ3)反射率与第二通道(HJ2)和第四通道(HJ4)反射率之和的比值与洞庭湖水体叶绿素浓度具有较高的相关性,从而构建基于环境一号卫星多光谱数据的洞庭湖叶绿素a浓度反演模型;采用多期环
期刊
摘要根据对江苏省徐州市30个中心镇的调研分析,总结了当前中心镇人口和城市化的现状,并进一步分析了中心镇园区建设对劳动力流动的影响。结果表明,中心镇园区建设以及由此支撑的产业集群和农村劳动力的转移,有利于促进农村城镇化和人口城市化的进程。作为起辐射带动作用的中心镇,更应该利用自身优势,大力发展园区经济,壮大产业集群,以此来吸引更多的劳动力。  关键词产业集群;劳动力转移;中心镇  中图分类号S-9文
期刊
摘要通过检索近几年中外相关研究文献,概述了大黄素固体脂质纳米粒、包合物、聚合物胶束、脂质体、纳米乳等新型载药系统的制备工艺、工艺优化和包封率情况;同时进一步介绍了大黄素新型制剂在发挥抗肿瘤药效时具有的组织相容性好、治疗浓度低、靶向性好、药物溶解度高、半衰期久等显著优势,为大黄素新型制剂抗肿瘤的进一步研究提供试验依据和理论参考。  关键词大黄素;新剂型;抗肿瘤  中图分类号R73文献标识码A文章编号
期刊
摘要为了提升气象网络管理的现代化水平,提高业务质量,榆林市气象局通信网络监控报警系统的设计开发基于.NET平台,采用C#、PHP、TSQL等语言,实现了网络状态自动监控、故障短信报警、故障原因填报、网络运行质量统计、固定IP签到、单机断电检测6个功能,具有实用性、易管理、低成本、可扩展等特点。介绍了系统的设计思路、开发的技术方法、系统结构和功能,详细阐述了网络自动监控、短信发送和接收、大数据存储、
期刊
摘要针对近年来蔬菜大棚因为降雪而出现的大面积减产问题,设计了一种基于无线传感器网络ZigBee和LabVIEW的蔬菜大棚积雪量检测系统。系统的传感器节点、路由节点、协调器节点都以CC2530为核心,分别分布在不同位置的终端节点,采集积雪厚度后,通过路由节点将数据传送到协调器节点;协调器通过以太网网关将数据发送到上位机检测;上位机界面采用LabVIEW开发,可实现实时检测、历史数据查询及报警等功能。
期刊
摘要通过遥感影像来构造反照率(Albedo)和归一化植被指数(NDVI)特征空间是一种提取土地荒漠化信息的有效方法。该研究利用Landsat遥感影像来构造赤峰及周边地区Albedo-NDVI特征空间,分析当地2000和2008年的沙漠化状况。结果表明,随着时间的推移,当地植被覆盖度有所增加,土壤含水量以及沙漠化程度有所改善,政府政策的引导已见成效。  关键词沙漠化;Albedo;NDVI;特征空间
期刊