【摘 要】
：
以国内商品化水貂犬瘟热病毒疫苗所用毒株CDV-3为模板,构建犬瘟热病毒感染性c DNA克隆,为犬瘟热病毒新型疫苗研制、致病机理研究提供理论基础。设计13对引物对其全基因组序列
【基金项目】
：
国家自然科学基金(No.31902275);国家重点研发计划(No.2016YFD0501001);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(No.1610342020017)资助~~
论文部分内容阅读
以国内商品化水貂犬瘟热病毒疫苗所用毒株CDV-3为模板,构建犬瘟热病毒感染性c DNA克隆,为犬瘟热病毒新型疫苗研制、致病机理研究提供理论基础。设计13对引物对其全基因组序列测定,分析单一酶切位点,将CDV-3的全长分5个片段进行RT-PCR扩增。经酶切拼接,将5个片段顺次插入到酶切位点改造后的真核载体pc DNA3.2的多克隆酶切位点处,同时在F1首端和F5末端分别加入锤头状核酶和丁型肝炎核酶序列,获得CDV-3株的全长c DNA质粒（pcDNA3.2-CDV-3）。构建表达CDV-3 N、P、L蛋白的3个辅助质粒。利用转染试剂LipofectamineTM 2000将全长质粒和3个辅助质粒共转染293T细胞,3 d后,将上清接种到Vero细胞。观察犬瘟热病毒典型合胞体病变,对重组病毒进行免疫荧光鉴定和标签鉴定。最后,比较wtCDV-3和rCDV-3的生长特性。全长质粒和辅助质粒的酶切鉴定和序列测序均正确。拯救的重组病毒能在Vero细胞上形成典型的合胞体病变,经RT-PCR、间接免疫荧光和电镜观察鉴定,证明成功拯救出重组病毒rCDV-3株。rCDV-3的病毒滴度最高达到107.667 TCID50/mL,比wtCDV-3的滴度106.667 TCID50/mL高出约10倍。rCDV-3感染Vero细胞后,迅速大量增殖,于感染后36 h达到最高病毒滴度。而wt CDV-3增殖平缓,感染后72 h时病毒含量达到最大。文中建立的高效CDV-3株反向遗传操作平台,为犬瘟热病毒新型疫苗研制和致病机理研究奠定基础。
其他文献
在数字学术环境下,信息素养教育与科研学术过程的结合更为紧密,为使信息素养教育在数字学术环境中获得可持续性发展,教育内容取向与教育策略选择成为关键因素。利用内容分析
斯坦福大学科学家宣布已创造出世界上最薄并且最具效率的光吸收剂。科学家们指出，这一纳米结构的厚度只相当于普通纸张的数千分之一，不仅大幅削减成本，还可提升太阳能电池的转换
从雷公藤（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ ｗ ｉｌｆｏｒｄｉｉＨｏｏｋ． ｆ．）的叶和根中分离到一个新的环氧二萜内酯化合物，据其理化性质，ＵＶ、ＩＲ、ＭＳ、１Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＯＥ、２Ｄ－ＣＯＳＹ、２Ｄ－ＮＯＥＳＹ 和选择性远程ＤＥＰＴ谱等光谱数据分析，并结合分子图形学和分子力学计算确定了它的化学结构，命名
在高速互连时代,芯片封装BallMap不再是以前简单任意排列,设计过程中需要考虑互连结构的寄生效应对高速信号的影响。本文主要针对高速差分信号,从BGA利用率和串扰两方面,利用
恒定磁场处理慢生大豆根瘤菌“005”和接种后的大豆植株,发现磁场可以提高根瘤的固氮活性。在一定的磁场强度(70—100mT)下,固氮活性平均可以提高4—5倍,植株的结瘤数和根瘤
薏苡(Coix lacryma-jobi L.)花药壁的发育属单子叶植物型。小孢子母细胞减数分裂前期Ⅰ时,其胼胝质壁上存在胞质通道。胞质分裂属连续型。四分体呈左右对称式排列。生殖细胞
少数民族地区拥有良好的民族音乐环境和丰富的音乐实践,这些可以作为不同课程和不同学习方法的资源。在这里,音乐实践有时比书本上的理论知识显得更为重要。同时,少数民族音
中央关于制定国发经济和社会发展第十一个五年规划的建议指出：发展循环经济是建设资源节约型、环境友好型社会和实现可持续发展的重要途径。坚持开发节约并重、节约优先，按照减
利用代数知识结合Guo-Krasnosel＇skii不动点定理研究三阶非线性差分方程边值问题△3u（t-1）＋f（t,u（t-1）,u（t）,u（t＋1））=0,t∈Z（1,N）,u（0）=0,u（1）=0,u（N＋2）=0三个正解存在的条件.
在深入研究已知产品的外形尺寸、脆值、缓冲材料性能参数、运输条件、流通条件和衬垫参数的条件下 ,缓冲包装设计的理论。从而开发软件以求得最经济的缓冲衬垫 ,并得到其外形尺寸和结构。