【摘 要】
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目的 探究敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因对炎性培养条件下C2C12细胞免疫分子表达的影响.方法 采用慢病毒基因干扰技术敲减C2C12细胞的CaMKⅣ基因,以2％马血清将
【机 构】
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南方医科大学基础医学院解剖学教研室,广东省医学生物力学重点实验室,广州510515;四川省绵阳市第三人民医院检验科,四川绵阳,621002
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目的 探究敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因对炎性培养条件下C2C12细胞免疫分子表达的影响.方法 采用慢病毒基因干扰技术敲减C2C12细胞的CaMKⅣ基因,以2％马血清将C2C12细胞分化成肌管,以干扰素-γ(IFN-γ)刺激C2C12细胞,采用Real-time PCR和Western blotting检测CaMKⅣ的表达,采用Western blotting和免疫荧光检测免疫分子主要组织相容性复合体(MHC) class Ⅰ(H-2Kb)、MHC classⅡ(H2-Ea)、Toll样受体3(TLR3)的表达,采用Real-time检测肌细胞分泌型促炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α和单核细胞趋化因子(MCP)-1的基因表达.结果 IFN-γ可诱导成肌干细胞以及分化肌管表达或上调表达免疫分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、TLR3,同时上调C2C12细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-1α和MCP-1的基因表达量;敲减CaMKⅣ基因导致上述上调趋势被抑制.结论 敲减CaMKⅣ基因可有效抑制IFN-γ诱导的免疫分子的表达,可能提示CaMKⅣ参与调节肌细胞的免疫学特性.
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