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【摘要】目的：研究清热颗粒中芦丁含量和测定方法。方法：采用 HPLC 法分别对6个批次的样品中芦丁含量进行测定。色谱法条件为ZORBAX SB-C18柱（200mm×46mm，5μm），以甲醇-05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波长为 358nm，柱温为 30℃。结果：芦丁进样量在0206～206μg范围内与峰面积呈线性关系，平均回收率为9986%，r =09994，RSD为117%（n=6）。结论：HPLC法简便、可靠、准确，可用于清热颗粒的质量控制。
【关键词】清热颗粒； 芦丁； 含量测定
【中图分类号】R284【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）06-0029-02
清热颗粒为广西柳州市中医院院内制剂（批准文号为桂药制字Z02060094），由桑叶、野菊花、紫花地丁、九里明、蒲公英、岗梅根六味药组方，具有清热解毒、抗菌消炎、清肝明目、疏风散热的功效，用于感冒发热、目赤头痛、上呼吸道感染，咽喉肿痛及各种疥疮，临床疗效显著。桑叶为桑科植物桑Morus alba L的干燥叶，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效，用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花[1]。其含有黄酮类、生物碱类、苯丙素类、有机酸类、甾体及三萜类等多种化合物[2]。桑叶为方中君药，芦丁是其主要化学成分。为了更好的控制制剂的质量，保证其疗效，研究用高效液相色谱法测定清热颗粒中芦丁的含量。
1仪器与材料
11仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；XS205Du分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；HH-S恒温水浴锅（江苏金坛医疗仪器厂）；RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
12材料芦丁对照品（批号：100080-201408，含量902%，中国药品生物制品检定所）；清热颗粒（批号：20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201，本院自制）；甲醇（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司）；磷酸（分析纯，广州化学试剂厂）。
2方法
21溶液的配制
211对照品溶液的配制精密称定芦丁对照品2575mg于25mL容量瓶中，加甲醇溶解制成103 mg/mL的溶液，摇匀，精密量取1mL，移至10mL的容量瓶中，加甲醇溶解制成濃度为0103mg/mL的对照品溶液，即得。
212供试品溶液的配制取10袋清热颗粒内容物，研细，混匀取约2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加甲醇50mL，加热回流30min，滤过，滤渣再用甲醇50mL，同法提取2次，合并滤液。减压回收溶剂，残渣用甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，过045μm滤膜，取续滤液，即得。
213阴性对照品溶液的制备以相同的处方比例取除桑叶外的药材，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。
22色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（200mm×46mm，5μm）；流动相：以甲醇为流动相A，以05%的磷酸溶液为流动相B，按表1进行梯度洗脱；流速：1mL/min；检测波长：358nm；柱温：30℃。
23方法学考察
231线性关系取0103mg/mL芦丁对照品溶液分别进样 2、5、75、10、125、20μL测定峰面积。以峰面积为纵坐标，质量为横坐标绘制标准曲线，得芦丁回归方程：Y=20E+9X-13E+5，r=09994。结果芦丁在0206～206μg范围内线性关系良好。
24样品测定精密称取6个批号的样品各适量，按供试品制备方法制备样品溶液，在色谱条件下测定，用外标法计算芦丁的含量。结果批号为20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201的样品中芦丁的含量分别为0130mg/袋，0152mg/袋，0175mg/袋，0128mg/袋，0142mg/袋，0126mg/袋，平均为0142mg/袋。
3讨论
将芦丁对照品的甲醇溶液在200nm～600nm 的范围内进行扫描，芦丁在215nm、258nm、358nm 处出现 3 个吸收峰，考虑到在短波长位置，处方中其它的组分干扰太大，结合文献报道[1，3-4]，选择358nm作为检测波长。
研究还对含量测定中流动相的条件进行了考察，曾采用甲醇-水（40∶60），甲醇-1%冰醋酸溶液（35∶65）及 甲醇-05%磷酸溶液（35∶65）作为测定条件，但峰出现拖尾。选用流动相为甲醇-05%磷酸溶液进行梯度洗脱[1]，分离效果好，分离度大于15，理论塔板数大于3000，且阴性无干扰，故选择本系统为流动相。
在提取溶剂的选择上，采用甲醇、乙醇、水作为提取溶剂，通过比较单一溶剂和混合溶剂，最后选定甲醇溶液作为最佳提取溶剂。考察了加热回流提取时间的影响，结果发现加热回流处理20、30、40min 差别不大，为了提取完全同时又节约时间，故选择加热回流提取30min为宜。
综上，采用HPLC法测定清热颗粒中芦丁的含量，该方法简便、可靠、准确，可用于清热颗粒的质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京：中国医药科技出版社，2015：297.
[2]王晓静，王元书，邱进，等.桑叶化学成分研究 [J].食品与药品，2007 （1） ：9.
[3]曾森，刘虹，张德芹，等.对市售桑叶药材中芦丁的含量调查[J].中医药导报，2010，16（4）：77-78.
[4]郭玉，唐国涛，陈淑娴，等.槐花米中芦丁提取方法的比较研究[J].中成药，2007，29（11）：1675-1677.
【关键词】清热颗粒； 芦丁； 含量测定
【中图分类号】R284【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）06-0029-02
清热颗粒为广西柳州市中医院院内制剂（批准文号为桂药制字Z02060094），由桑叶、野菊花、紫花地丁、九里明、蒲公英、岗梅根六味药组方，具有清热解毒、抗菌消炎、清肝明目、疏风散热的功效，用于感冒发热、目赤头痛、上呼吸道感染，咽喉肿痛及各种疥疮，临床疗效显著。桑叶为桑科植物桑Morus alba L的干燥叶，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效，用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花[1]。其含有黄酮类、生物碱类、苯丙素类、有机酸类、甾体及三萜类等多种化合物[2]。桑叶为方中君药，芦丁是其主要化学成分。为了更好的控制制剂的质量，保证其疗效，研究用高效液相色谱法测定清热颗粒中芦丁的含量。
1仪器与材料
11仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；XS205Du分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；HH-S恒温水浴锅（江苏金坛医疗仪器厂）；RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
12材料芦丁对照品（批号：100080-201408，含量902%，中国药品生物制品检定所）；清热颗粒（批号：20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201，本院自制）；甲醇（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司）；磷酸（分析纯，广州化学试剂厂）。
2方法
21溶液的配制
211对照品溶液的配制精密称定芦丁对照品2575mg于25mL容量瓶中，加甲醇溶解制成103 mg/mL的溶液，摇匀，精密量取1mL，移至10mL的容量瓶中，加甲醇溶解制成濃度为0103mg/mL的对照品溶液，即得。
212供试品溶液的配制取10袋清热颗粒内容物，研细，混匀取约2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加甲醇50mL，加热回流30min，滤过，滤渣再用甲醇50mL，同法提取2次，合并滤液。减压回收溶剂，残渣用甲醇溶解，转移至25mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，过045μm滤膜，取续滤液，即得。
213阴性对照品溶液的制备以相同的处方比例取除桑叶外的药材，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。
22色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（200mm×46mm，5μm）；流动相：以甲醇为流动相A，以05%的磷酸溶液为流动相B，按表1进行梯度洗脱；流速：1mL/min；检测波长：358nm；柱温：30℃。
23方法学考察
231线性关系取0103mg/mL芦丁对照品溶液分别进样 2、5、75、10、125、20μL测定峰面积。以峰面积为纵坐标，质量为横坐标绘制标准曲线，得芦丁回归方程：Y=20E+9X-13E+5，r=09994。结果芦丁在0206～206μg范围内线性关系良好。
24样品测定精密称取6个批号的样品各适量，按供试品制备方法制备样品溶液，在色谱条件下测定，用外标法计算芦丁的含量。结果批号为20160725、20160801、20160912、20161025、20161125、20161201的样品中芦丁的含量分别为0130mg/袋，0152mg/袋，0175mg/袋，0128mg/袋，0142mg/袋，0126mg/袋，平均为0142mg/袋。
3讨论
将芦丁对照品的甲醇溶液在200nm～600nm 的范围内进行扫描，芦丁在215nm、258nm、358nm 处出现 3 个吸收峰，考虑到在短波长位置，处方中其它的组分干扰太大，结合文献报道[1，3-4]，选择358nm作为检测波长。
研究还对含量测定中流动相的条件进行了考察，曾采用甲醇-水（40∶60），甲醇-1%冰醋酸溶液（35∶65）及 甲醇-05%磷酸溶液（35∶65）作为测定条件，但峰出现拖尾。选用流动相为甲醇-05%磷酸溶液进行梯度洗脱[1]，分离效果好，分离度大于15，理论塔板数大于3000，且阴性无干扰，故选择本系统为流动相。
在提取溶剂的选择上，采用甲醇、乙醇、水作为提取溶剂，通过比较单一溶剂和混合溶剂，最后选定甲醇溶液作为最佳提取溶剂。考察了加热回流提取时间的影响，结果发现加热回流处理20、30、40min 差别不大，为了提取完全同时又节约时间，故选择加热回流提取30min为宜。
综上，采用HPLC法测定清热颗粒中芦丁的含量，该方法简便、可靠、准确，可用于清热颗粒的质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京：中国医药科技出版社，2015：297.
[2]王晓静，王元书，邱进，等.桑叶化学成分研究 [J].食品与药品，2007 （1） ：9.
[3]曾森，刘虹，张德芹，等.对市售桑叶药材中芦丁的含量调查[J].中医药导报，2010，16（4）：77-78.
[4]郭玉，唐国涛，陈淑娴，等.槐花米中芦丁提取方法的比较研究[J].中成药，2007，29（11）：1675-1677.