【摘 要】
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目的 从家蝇的EST测序数据库中筛选获得家蝇几丁质酶基因8(MDCht8),对其进行分子特性分析,探讨Cht8基因在家蝇不同组织和发育时期的时空表达模式及其在家蝇免疫防御中的功能.
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院现代病原生物学重点特色实验室,贵州贵阳550025;贵州省疾病预防控制中心;贵州医科大学食品科学学院;贵州医科大学基础医学院现代病原生物学重点特色实验室,贵州贵阳,550025
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目的 从家蝇的EST测序数据库中筛选获得家蝇几丁质酶基因8(MDCht8),对其进行分子特性分析,探讨Cht8基因在家蝇不同组织和发育时期的时空表达模式及其在家蝇免疫防御中的功能. 方法 克隆MDCht8基因,借助MEGA 5.0软件采用邻接法构建系统进化树;采用实时荧光定量PCR检测MDCht8基因时空表达模式及微生物诱导后不同时间点(3、6、12、18、24、36、48 h)MDCht8基因表达水平的变化. 结果 MDCht8基因的ORF框全长1512 bp,编码一个含503个氨基酸的蛋白多肽,理论相对分子质量约为56.801 7×103,进化树分析显示该蛋白与果蝇Cht8遗传距离较近.时空表达模式分析显示,MDCht8基因在2龄幼虫和3龄幼虫内表达量较高,家蝇3龄幼虫的各主要组织中以唾液腺和中肠中的表达水平较高.经白色念珠菌和大肠埃希菌诱导后,家蝇MDCht8基因出现明显上调,金黄色葡萄球菌诱导后未表现出明显上调.成功克隆了MDCht8基因,PCR扩增片段为1 512 bp,与预期相符. 结论 初步揭示了MDCht8基因在家蝇不同虫期,不同组织表达量不同,提示几丁质酶基因在家蝇生长发育过程中具有重要作用;MD-Cht8基因在家蝇幼虫受到病原微生物攻击后表达上调,且攻击后的不同时间点表达量不同,提示MDCht8基因编码的几丁质酶参与家蝇的免疫防御过程.
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