【摘 要】
：
目的:探讨肺鳞癌癌前病变恶性转化的机制. 方法:应用脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaetic acid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮癌变各阶段组织总蛋白质,采用固相pH梯度
【机 构】
：
中南大学湘雅医院医学实验研究中心,卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,湖南,长沙,410078;湖南师范大学生命科学学院,湖南,长沙,410081
【基金项目】
：
湖南省科技厅科研项目;湖南省卫生厅科研项目;国家自然科学基金;教育部跨世纪优秀人才培养计划;国家重点基础研究发展计划(973计划)
论文部分内容阅读
目的:探讨肺鳞癌癌前病变恶性转化的机制. 方法:应用脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaetic acid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮癌变各阶段组织总蛋白质,采用固相pH梯度(immobilized pH gradient, IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点. 结果:①重复性检测表明同一例鳞状上皮化生组织的三块凝胶的平均点数为1 216 ±75 ,平均匹配点数为1 082±67,匹配率达89.3% , 且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是(0.865±0.247)mm ,在SDS-PAGE方向上的偏差为(0.971±0.104)mm,由此获得了分辨率较高、重复性较好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱,正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织凝胶的平均蛋白质点数依次为1 190±36、1 227±39、1 272±41、1 326±52;②比较分析人支气管正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织各7例的双向凝胶电泳图谱,发现癌变前一阶段与后一阶段两两间的差异蛋白点分别为 34±16、41±15、46±13;③对24个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞增生、分化、细胞周期调控、信号传导等有关的蛋白质. 结论:本研究建立了分辨率高、重复性较好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定了一些与支气管上皮癌变相关的差异表达的蛋白质,为进一步探讨肺鳞癌癌变机制,筛选肺鳞癌的特异性分子标志物奠定了初步基础.
其他文献
目的 探讨云南汉族人群HLA-DRB1等位基因与高血压病的相关性.方法应用病例-对照相关分析方法,采用PCR-序列特异性引物基因分型技术对云南汉族91名健康个体和83例高血压病患者(均无血缘关系)进行HLA- DRB1位点17个特异性的等位基因分型,并进行遗传相关分析.结果原发性高血压患者中DRB1*1501/2的频率为(0.219)显著高于对照组(0.060),χ2=18.331,P<0.01,
目的探讨PDGFR及蛋白c-Fos的表达与肾细胞癌(CC)发生的关系.方法应用免疫组化SP法检测12例正常肾组织、14例癌旁肾组织、46例肾细胞癌组织中PDGFR和c-Fos蛋白的表达,并结合肾
目的 探讨上皮性卵巢癌中金属硫蛋白 (MT)及肺耐药蛋白 (LRP)的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化SP法及半定量分析方法 ,检测 1995～ 2 0 0 1年上皮性卵巢癌 6 4例 ,复发
目的探讨抗CD44单克隆抗体A3D8对HL-60细胞增殖及分化的影响,寻找急性髓系白血病(AML)治疗的新靶点.方法以AML细胞株HL-60为模型,通过观察细胞生长、形态学、表面分化抗原、
目的 :探讨Fas相关死亡结构域蛋白 (Fas associateddeathdomainprotein ,FADD)在非小细胞性肺癌(non smallcelllungcancer,NSCLC)中的表达及意义。方法 :免疫组化SP法检测 6
目的 检测正常肝脏、慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌组织中COX-2基因的表达,并分析COX-2基因在肝细胞癌中表达的临床意义.方法利用免疫组织化学方法检测110例肝细胞癌组织中COX-2基因的表达,并以5例正常肝组织,12例慢性乙型肝炎组织,15例肝硬化组织为对照,比较其中COX-2基因表达的差异.结果正常肝组织、慢性肝炎组织、肝硬化组织、肝细胞癌组织中COX-2的表达率分别为0%、33.3%、46.
在干扰素抗病毒治疗中,其疗效与树突状细胞(DC)的功能状态关系如何现在还不清楚,为此对干扰素治疗前、后24例CHB患者外周血DC的一些重要表面分子进行检测,试图对此进行初步探讨。
目的 探索建立稳定的SCID鼠人肝癌皮下移植及免疫重建(人HCC-PBL-SCID)复合模型的方法.方法经SCID鼠腹腔内注射人PBL、皮下接种人肝癌细胞,定期检测SCID鼠体内人淋巴细胞及其功能、观察皮下成瘤潜伏期及成瘤率.结果人HCC-PBL-SCID复合模型鼠和单纯人HCC-SCID模型鼠成瘤率均为100%,但前者成瘤潜伏期显著延长、肿瘤明显缩小(P分别<0.01、<0.05).人HCC-P
目的 研究黑色素瘤相关抗原1(MAGE-1)在中国肝癌患者中的表达,并阐明MAGE-1基因变异是肿瘤细胞内的突变还是单核苷酸多态性(SNP),以及基因变异在人群中的分布状况. 方法提取19例原发性肝癌(HCC)患者的癌组织、癌旁组织总RNA,用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测组织MAGE-1基因mRNA的表达,并通过PCR产物测序分析编码基因是否存在变异;提取HCC患者癌组织、癌旁组
目的 探讨肺功能障碍对腹腔镜胆囊切除术的影响。方法 1995～2003年，通过监测114例肺功能障碍和120例肺功能正常的病人围手术期肺功能指标，比较两者在行腹腔镜胆囊切除术前后肺功