【摘 要】
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目的 观察雷帕霉素对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)抗栓功能的影响.方法 将体外培养的HUVEC中加入不同浓度[0(对照组)、0.1、1和10 ng/ml]的雷帕霉素,孵育2、4、8、12和24 h
【机 构】
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首都医科大学附属北京安贞医院心内科十二病房
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目的 观察雷帕霉素对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)抗栓功能的影响.方法 将体外培养的HUVEC中加入不同浓度[0(对照组)、0.1、1和10 ng/ml]的雷帕霉素,孵育2、4、8、12和24 h后分别用实时定量RT-PCR和Western印迹方法检测组织因子(TF)、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)、内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)和血栓调节蛋白(TM)的mRNA和蛋白表达;采用血液凝固分析仪评估HUVEC的凝血功能.结果 雷帕霉素呈浓度依赖性提高了TF和PAI-1的表达,抑制了eNOS和TM表达,mRNA水平在孵育后8 h最明显,蛋白表达在12 h最为显著,与正常HUVEC(对照组)相比,eNOS的表达降低了65%(P＝0.006),TM降低了52%(P=0.005),PAI-1升高了1.7倍(P=0.009),TF升高了2.8倍(P=0.006),持续至24 h;雷帕霉素可显著缩短HUVEC的凝血时间[对照组(152±17)s与雷帕霉素组(89±9)s,P=0.005].结论 雷帕霉素呈浓度依赖性升高了促栓基因TF和PAI-1表达,抑制了抗栓基因eNOS和TM表达,从而导致内皮抗栓功能失调,凝血时间缩短,这为进一步认识雷帕霉素洗脱支架置入后血栓形成的机制提供了实验依据.
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