【摘 要】
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目的 构建重组泛素连接酶SH2-U-box、SH2-RING,并克隆进入pFlag-CMV4真核表达载体,为研究靶向降解慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)患者瘤细胞中过度活化
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目的 构建重组泛素连接酶SH2-U-box、SH2-RING,并克隆进入pFlag-CMV4真核表达载体,为研究靶向降解慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)患者瘤细胞中过度活化的BCR/ABL,抑制肿瘤细胞的生长提供基础.方法 设计引物,扩增接头分子Grb2的SH2结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U-box、Cbl的RING结构域,通过重组PCR,将SH2分别与U-box、RING进行融合,融合片段双酶切之后插入真核表达载体pFlag-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HEK293T细胞,Western 印迹验证重组质粒的表达.结果 PCR结果提示SH2-U-box条带大小888 bp,SH2-RING大小为633 bp,重组质粒酶切鉴定和测序结果均正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论 成功构建真核重组表达载体pFlag-CMV4-SH2-U-box和 pFlag-CMV4-SH2-RING,转染HEK293T细胞后能够正确表达,为后续研究奠定了基础.
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