【摘 要】
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用异硫氰酸胍-酚-氯仿-步法从棉铃虫雌性成虫脂肪体中提取总RNA,经过Oligo(dT)纤维柱分离出muRNA.以mRNA为模板,Oligo(dT)为引物,在逆转录酶催化下合成单链cDNA(sscDNA).然后
【机 构】
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山东大学生命科学学院生物系,济南,250100
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用异硫氰酸胍-酚-氯仿-步法从棉铃虫雌性成虫脂肪体中提取总RNA,经过Oligo(dT)纤维柱分离出muRNA.以mRNA为模板,Oligo(dT)为引物,在逆转录酶催化下合成单链cDNA(sscDNA).然后在E.coli DNA聚合酶Ⅰ与RNaseH共同作用下,进一步合成双链cDNA(dscDNA).平末端dscDNA与EcoRI/Not Ⅰ接头连接,插入λgt11表达载体,经体外包装后转染Y1090r宿主菌,构建成棉铃虫脂肪体cDNA文库.该文库的滴度为3.5×105pfu/mL,重组率为100%,该文库适合于筛选低丰度mRNA的cDNA克隆.
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