【摘 要】
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目的:研究睾丸生殖细胞Fox j2条件性敲入小鼠(Stra8-cre;Fox j2tg/+小鼠)的生殖表型并鉴定转录因子FOX J2的靶基因,探讨睾丸中过表达Foxj2对雄性生育的影响及作用机制.方法:基于Cre-loxP重组系统构建睾丸生殖细胞Foxj2条件性敲入小鼠模型(Stra8-cre;Foxj2tg/+小鼠);统计每窝产仔数以及卵母细胞胞浆注射精子(ICSI)后的受精率以观察雄鼠生育力;HE染色对睾丸、附睾形态进行观察;计算机辅助精子分析(CASA)检测精子浓度及运动能力;RT-qPCR、Wes
【机 构】
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上海交通大学医学院组织胚胎学与遗传发育学系/上海市生殖医学重点实验室,上海200025;上海交通大学实验动物科学部,上海200025;上海交通大学医学院,上海200025
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目的:研究睾丸生殖细胞Fox j2条件性敲入小鼠(Stra8-cre;Fox j2tg/+小鼠)的生殖表型并鉴定转录因子FOX J2的靶基因,探讨睾丸中过表达Foxj2对雄性生育的影响及作用机制.方法:基于Cre-loxP重组系统构建睾丸生殖细胞Foxj2条件性敲入小鼠模型(Stra8-cre;Foxj2tg/+小鼠);统计每窝产仔数以及卵母细胞胞浆注射精子(ICSI)后的受精率以观察雄鼠生育力;HE染色对睾丸、附睾形态进行观察;计算机辅助精子分析(CASA)检测精子浓度及运动能力;RT-qPCR、Western印迹、免疫组化观察连接蛋白43(Cx43)在睾丸中的表达及定位;ChIP-PCR、双荧光素酶报告基因验证FOX J2与Cx43启动子区的结合.结果:Stra8-cre;Foxj2tg/+雄鼠每窝产仔数较对照组低,ICSI后的受精率较对照组低,生育力下降;睾丸重量及体积较同窝对照雄鼠减少近一半;HE染色显示生精小管中生殖细胞脱落,精母细胞及精子细胞大量减少;CASA结果显示附睾尾部精子浓度较对照组显著下降;RT-qPCR和Western印迹显示Stra8-cre;Foxj2tg/+雄鼠睾丸中Cx43转录水平和蛋白水平均升高;ChIP-PCR和双荧光素酶报告基因法检测发现FOX J2可以与Cx43基因启动子区域直接结合.结论:FOXJ2过表达可能通过调控Cx43的高表达,导致Stra8-cre;Foxj2tg/+雄鼠精子发生障碍,生育力下降.
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