【摘 要】
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目的 探讨miR-138在结肠癌细胞中通过调控沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)参与细胞凋亡的机制.方法 采用RT-qPCR检测miR-138在结肠癌细胞株HCT116、SW480、Caco-2、HT29、SW1116中的表达.构建荧光素酶报告质粒,双荧光素酶实验验证靶标分子.将miR-138 mimics(类似物)、miR-138 inhibitors(抑制物)和miR-138 NC(阴性对
【机 构】
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400030重庆,重庆大学附属肿瘤医院,肿瘤转移与个体化诊治转化研究重庆市重点实验室
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目的 探讨miR-138在结肠癌细胞中通过调控沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)参与细胞凋亡的机制.方法 采用RT-qPCR检测miR-138在结肠癌细胞株HCT116、SW480、Caco-2、HT29、SW1116中的表达.构建荧光素酶报告质粒,双荧光素酶实验验证靶标分子.将miR-138 mimics(类似物)、miR-138 inhibitors(抑制物)和miR-138 NC(阴性对照)分别转染至HT29、Caco-2细胞,RT-qPCR和Western bolt检测处理前后HCT116细胞中miR-138、SIRT1、Caspase-3及Bcl-2的表达;流式细胞仪检测HT29、Caco-2细胞凋亡情况.结果 miR-138在结肠癌细胞Caco-2中表达水平最低,在HT29细胞中表达水平最高.双荧光素酶实验验证结果显示:在HT29细胞中,SIRT1为miR-138的靶标分子,miR-138可在mRNA及蛋白水平抑制SIRT1的表达.miR-138 mimics转染至Caco-2细胞后,其SIRT1、Bcl-2表达显著降低(P＜0.05),Caspase-3表达显著升高(P＜0.05),细胞凋亡增加(P＜0.05);而miR-138 inhibitors转染至HT29细胞后,其SIRT1、Bcl-2表达显著升高(P＜0.05),Caspase-3表达显著降低(P＜0.05),细胞凋亡减少(P＜0.05).结论 miR-138可通过影响其靶标分子SIRT1的表达进而参与结肠癌细胞凋亡水平的调控.
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