肺炎链球菌疫苗候选蛋白质谷氨酰胺tRNA合成酶的保守性与抗原性分析

• 作 者: 闵迅 黄美容 黄健 董杰 陈特 王虹 钟文 尹一兵
• 机 构: 重庆医科大学检验系临床检验诊断学实验室
• 出 处: 临床检验杂志
• 发表日期: 2012年06期
• 关键词: 肺炎链球菌 谷氨酰胺tRNA合成酶 保守性 抗原性 疫苗

目的分析作为肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)疫苗候选靶点的谷氨酰胺tRNA合成酶(glutamyl tRNA syn-thetase,Gts)的保守性和抗原性,并评价Gts抗原诱导产生的抗体在体内是否存在年龄依赖性。方法 PCR扩增S.pn D39标准菌株的Gts基因,构建pET32a(+)-Gts原核表达质粒并测序。扩增S.pn不同血清型的Gts基因,测序后比对分析其保守性。表达Gts重组蛋白质,并进行纯化和western blot鉴定。用Gts重组蛋白质免疫BALB/c小鼠制备抗Gts的多克隆抗体并测定其效价。western blot分析Gts在不同血清型S.pn中的表达情况。ELISA法测定本地区不同年龄段的健康人及患者血清中抗Gts抗体的效价。结果构建了以D39血清型S.pn为DNA模版的pET32a(+)-Gts表达质粒,其测序结果与预期相符。8株不同血清型S.pn的Gts基因编码区大小与D39菌株一致,约为1 461 bp;经测序后序列比对,其基因一致性>99.0%。经Ni柱纯化得到纯度>95%的Gts重组蛋白质,且能与抗His tag标签抗体特异性结合。采用Gts蛋白质经腹腔免疫小鼠后,其血清抗Gts抗体滴度高达1.024×106(5.12×105,4.096×106),与对照组比较有显著差异(P<0.01)。western blot分析证实,8种不同血清型S.pn全菌裂解物均在Mr约55.9×103处出现特异性反应条带。在不同年龄段的健康人群及患者血清中,均产生高滴度的抗Gts抗体,且随着年龄增加而递增。结论 Gts重组蛋白质免疫原性好,在不同血清型的S.pn中均高度保守,且诱导产生的抗体反应存在年龄依赖性,是一个良好的候选疫苗靶点。