黑果花楸与2种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较

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  摘要[目的] 为黑果花楸相关加工产品提供理论和含量依据。[方法]以黑果花楸、蓝莓和蓝靛果为材料,采用紫外-分光光度法测定3种小浆果多糖及总黄酮含量,pH示差法测定花色苷含量,并进行比较分析。[结果]黑果花楸全果的花色苷、总黄酮、多糖含量均高于蓝莓和蓝靛果,在所测3种小浆果中最高,分别为0.352 0、2.636、1.764 mg/g。[结论]黑果花楸中花色苷、总黄酮、多糖含量较高,具有很高的营养价值和药用价值,有待进一步开发利用。
  关键词蓝莓;蓝靛果;黑果花楸;花色苷;多糖
  中图分类号S38文献标识码A文章编号0517-6611(2016)01-122-03
  Abstract[Objective] To provide theoretical and content basis for the related processing products of Aronia melanocarpa.[Method] With A. melanocarpa, blueberry and Lonicera edulis as the materials, flavonoids and polysaccharides contents in the three small berries were detected by UVVIS spectrophotometry. Anthocyanin content was detected by pH differential method. And comparative analysis was carried out. [Result] Anthocyanin, flavonoids and polysaccharides contents in A. melanocarpa were all higher than those in blueberry and L. edulis, which were 0.352 0, 2.636 and 1.764 mg/g, respectively. [Conclusion] A. melanocarpa has relatively high contents of anthocyanin, flavonoids and polysaccharides, which is of high medicinal and nutritional values, and is worthy of further research.
  Key wordsBlueberry; Lonicera edulis; Aronia melanocarpa; Anthocyanin; Polysaccharide
  小浆果泛指体积较小、多汁的一类果树的果实,主要包括蓝莓、蓝靛果、黑果花楸、树莓、黑加仑、蔓越橘等[1-5],它们具有较高的营养价值和独特的口感,深受人们的喜爱。小浆果富含维生素和多种生物活性物质[6-7],在预防慢性疾病和维持人体健康方面有较好的作用。
  蓝莓(Blueberry),又称越橘、蓝浆果,杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)。蓝莓果实中天然色素含量最高[8],如原花青素、花色苷;除此之外,还含有糖类、有机酸、维生素C、多种微量元素和食用纤维等。由于其含有多种生物活性物质,因此具有抗肿瘤、清除体内自由基、提高免疫力等多种生理活性功能[9-10]。
  蓝靛果(Lonicera edulis),又称黑瞎子果、山茄子,忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)。蓝靛果果实营养丰富,富含糖类、有机酸、维生素和黄酮类等化合物[11-12],其制成的果汁含有大量的花色苷物质,具有极高的营养价值。現代医学研究表明,蓝靛果具有清热解毒、降血脂、降血压、改善肝脏的解毒功能,还能缓解放疗和化疗后的不良症状[13-14]。
  黑果花楸(Aronia melanocarpa),蔷薇科(Rosaceae)腺肋花楸属(Aronia)。黑果花楸含有丰富的维生素和黄酮类物质[15-16],对高血压、心脑血管疾病具有特殊的预防和治疗效果。
  以上3种小浆果中,蓝莓和蓝靛果在市场上的研发产品较多,而关于黑果花楸的研发产品较少。笔者对这3种小浆果中花色苷、总黄酮、多糖的含量进行测定,并进行比较分析,以期为黑果花楸深加工产品的开发提供理论依据。
  1材料与方法
  1.1材料
  1.1.1原材料。蓝莓、蓝靛果购于黑龙江省伊春市,黑果花楸购于黑龙江省黑河市,均由佳木斯大学药学院张宇教授鉴定。
  1.1.2主要试剂。葡萄糖对照品、浓硫酸、乙醇、苯酚、盐酸、三氯化铝、乙酸、乙酸钠、氯化钾,均为分析纯。
  1.1.3主要仪器。
  RE52 A 旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂;DL5B低速大容量离心机,上海安亭科学仪器厂;FA2004电子天平,上海恒平科学仪器有限公司;RHS25 pH计,上海仪电科学仪器股份有限公司;765紫外可见分光光度计,上海仪电分析仪器有限公司;HHS26S恒温水浴锅,山东鄄城华鲁电热仪器有限公司。
  1.2方法
  1.2.1花色苷含量测定。
  1.2.1.1缓冲液的配置。pH 1.0 缓冲液:精密称取1.49 g 氯化钾,用蒸馏水定容至100 mL,精密量取1.7 mL盐酸,用蒸馏水定容至100 mL;将0.2 mol/L氯化钾与0.2 mol/L盐酸以25∶67的比例混合,用氯化钾溶液调节pH(1.0±0.1)。pH 4.5 缓冲液:精密称取1.64 g乙酸钠,用蒸馏水定容至100 mL,用盐酸调节pH(4.5±0.1)。
  1.2.1.2花色苷的提取。分别称取10 g 3种小浆果的冻果样品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于200 mL锥形瓶中。按料液比为1∶10(m/V)加入100 mL 1%酸化乙醇溶液。在40 ℃的条件下,超声辅助提取45 min后过滤并收集滤液。将滤渣再次置于锥形瓶中,按上述条件再提取2次。合并3次收集的滤液,置于圆底烧瓶中,45 ℃旋转蒸发浓缩得到紫黑色黏稠粗提液。   1.2.1.3花色苷含量测定方法。该试验根据花色苷在pH 1.0时,在510 nm波长处有最大光吸收,而在pH 4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在510 nm波长处无吸收,所以可以利用pH示差法计算溶液中花色苷的含量。计算公式如下:
  花色苷含量(mg/g)=A×V×n×Mε×m×100
  式中,A=pH1.0-pH4.5;V为提取液总体积;n为稀释倍数;M为矢车菊3葡萄糖苷(Cy3Glu)的相对分子质量(449);ε为Cy3Glu的消光系数(29 600);m为样品质量(g)。
  1.2.2总黄酮含量测定。
  1.2.2.1显色试剂的配置。精密称取三氯化铝1.34 g,50%乙醇溶液定容至100 ml,配成0.1 mol/L的溶液。精密称取无水乙酸钠1.76 g,蒸馏水溶解至100 ml,配成0.2 mol/L的溶液。精密量取1.15 ml冰醋酸,蒸馏水定容至100 ml,配成0.2 mol/L的醋酸溶液。将配制好的醋酸钠溶液和冰醋酸溶液按比例混合,制得pH为5.2的缓冲溶液。
  1.2.2.2芦丁标准曲线的绘制。精密称取芦丁0.02 g,用50%乙醇溶液定容至100 ml,制成0.2 mg/ml的芦丁标准品溶液。精密吸取芦丁标准品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 ml,置于10 ml容量瓶,加入2.0 ml 0.1 mol/L的三氯化铝溶液,pH为5.2的醋酸钠-醋酸缓冲溶液1.0 ml,用50%乙醇定容至4 ml,40 ℃水浴显色15 min,在510 nm波长处测定吸光度。
  1.2.2.3总黄酮的提取。分别称取10 g 3种小浆果冻果样品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于200 ml锥形瓶中。按料液比为1∶10(M/V)加入100 ml 50%乙醇溶液。在40 ℃下,超声波辅助提取40 min后过滤并收集滤液。将滤渣再次置于锥形瓶中,按上述条件再提取2次。合并3次收集的滤液,置于圆底烧瓶中,减压浓缩得到黄酮粗提液。
  1.2.2.4
  总黄酮含量测定方法。精密量取1.0 ml的黄酮粗提液,用50%乙醇溶液定容至10 ml。从中吸取1.0 ml加入到10 ml容量瓶中,按“1.2.2.1”项下方法进行显色,再在510 nm波长处测定吸光度(平行3次)。利用芦丁标准曲线计算总黄酮的含量。
  1.2.3多糖含量测定。
  1.2.3.1
  葡萄糖标准曲线的绘制。精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖10.00 mg,置于100 ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀,配得葡萄糖标准溶液。精密吸取葡萄糖标准溶液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 ml,分别置于10 ml容量瓶中,加入蒸馏水补至2.0 ml,然后再加入5%苯酚溶液1.0 ml,摇匀,迅速加入浓硫酸 5.0 ml。摇匀,沸水浴15 min 后,在冷水中冷却至室温。在490 nm 波长处测吸光度。
  1.2.3.2
  多糖的提取。分别称取10 g 3种小浆果的冻果样品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于200 ml锥形瓶中。按料液比为1∶8(M/V)加入80 ml蒸馏水。在90 ℃的恒温水浴锅中提取4 h。取出,8层纱布过滤、离心。取上清液,旋转蒸发浓缩至原体积的 1/8,加入乙醇,使乙醇体积分数达到 80%,静置24 h。离心取沉淀,依次用丙酮、乙醚和乙醇洗涤脱脂,真空干燥,制得粗多糖。
  1.2.3.3
  多糖含量测定方法。精密称取5.00 mg粗多糖,置于50 ml的容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀。从中精密吸取1.0 ml溶液加入到10 ml容量瓶中,按“1.2.3.1”项下方法进行显色后,在波长490 nm波长处测吸光度(平行3次)。利用葡萄糖标准曲线计算多糖的含量。
  2结果与分析
  2.1花色苷含量测定结果根据“1.2.1”的方法测得3种小浆果样品的花色苷含量见表1。
  2.2总黄酮含量测定结果
  2.2.1芦丁标准曲线。
  以芦丁的浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,并进行线性回归,得回归方程:A= 25.235C+0.070 2,R2=0.993 2,线性范围为0.012~0.076 mg/ml。
  2.2.2总黄酮含量分析比较。由表2可见,供试的蓝莓、蓝靛果、黑果花楸中的总黄酮含量依次为1.917、1.695、2.636 mg/g,其中黑果花楸黄酮含量最高,蓝靛果中黄酮含量相对较低。
  3结论与讨论
  从试验测得的花色苷、总黄酮和多糖的含量分析来看,蓝莓、蓝靛果和黑果花楸均含有这3种物质,且其含量顺序为:花色苷,黑果花楸>蓝靛果>蓝莓;总黄酮,黑果花楸>蓝莓>蓝靛果;多糖,黑果花楸>蓝靛果 >蓝莓。蓝莓被誉为“浆果之王”,营养成分丰富。有研究指出,蓝莓的花青素含量是所有的水果与蔬菜中含量最高的。而通过该试验发现,黑果花楸中的花色苷、总黄酮及多糖的含量均高于蓝莓和蓝靛果,具有较高的营养价值,同时还有比蓝莓更好的开发和应用价值。
  目前市场上研发的蓝莓和蓝靛果的产品较多,而关于黑果花楸产品较少,因此该类产品具有较大的潜在经济价值。该试验可以为黑果花楸加工商品提供理论依据和含量依据,为黑果花楸的深加工产品的开发应用奠定基础。
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