H1N1亚型流感病毒M1和NA基因在昆虫杆状病毒系统中的共表达

• 作 者: 陈爱珺 姚立红 徐鹏卫 张智清 郭建强
• 机 构: 100052 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 卫生部医学病毒和病毒病重点实验室,100052 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 卫生部医学病毒和病毒病重点实验室,100052 北
• 出 处: 中华实验和临床病毒学杂志
• 发表日期: 2015年29期
• 关键词: 流感病毒 蛋白质类 神经氨酸酶 杆状病毒

目的

构建共表达H1N1亚型流感病毒M1和NA基因的重组杆状病毒。

方法

以PCR扩增H1N1亚型流感病毒A/PR/8/34毒株M1和NA基因，构建含有M1、NA双基因的重组转移载体pFBD-M1-NA，将其转化DH10Bac，获得重组Bacmid-M1-NA穿梭载体。将Bacmid-M1-NA转染sf9昆虫细胞，在细胞内包装出重组杆状病毒rBac-M1-NA，空斑实验测定病毒滴度，PCR方法鉴定外源基因插入情况。间接免疫荧光(IFA)检测M1、NA基因的表达情况。

结果

获得的重组杆状病毒滴度为1×10⁷pfu/ml；PCR检测结果证实M1、NA基因成功整合到了重组杆状病毒基因组。IFA结果显示，rBac-M1-NA感染的sf9昆虫细胞成功表达了M1、NA基因。

结论

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功构建了共表达H1N1亚型流感病毒M1和NA基因的重组杆状病毒，为研究流感病毒样颗粒(VLPs)的形成机制以及新型流感疫苗研发奠定了基础。