【摘 要】
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目的克隆青天葵黄酮类药效成分生物合成途径第一步关键酶——查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)的编码基因,并分析其序列特征及编码蛋白的功能。方法在前期青天葵转录组测
【机 构】
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广东医科大学; 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心; 岭南中药资源教育部重点实验室;
【基金项目】
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广东省自然科学基金博士启动项目(2015A030310519);广东省普通高校创新团队项目(2016KYTD02)
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目的克隆青天葵黄酮类药效成分生物合成途径第一步关键酶——查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)的编码基因,并分析其序列特征及编码蛋白的功能。方法在前期青天葵转录组测序获得的CHS基因序列片段的基础上,采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)从青天葵叶片中获取编码CHS的cDNA全长并克隆其编码区;利用生物信息学方法对其编码蛋白进行同源性比对和功能分析。结果克隆获得的青天葵CHS基因编码区长度为1173 bp,编码391个氨基酸。编码蛋白的氨基酸序列预测显示,青天葵CHS蛋白为酸性、亲水性蛋白,分子量约为96.9 kDa;不含有信号肽、转运肽和跨膜结构域,可能定位于细胞质中;具有CHS保守功能域,归属于CHS超家族,与文心兰等同科植物CHS蛋白的同源性可达87%。结论成功克隆得到青天葵查尔酮合成酶基因,为后续的基因功能鉴定和生物合成调控奠定了基础。
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