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目的建立HPLC测定硫酸阿托品滴眼液的含量和有关物质的方法。方法采用C18柱,磷酸缓冲液-甲醇（85：15）为流动相,检测波长206nm。结果硫酸阿托品浓度在25.98～519.5μg·mL-1之间与峰面积呈良好的线性关系（r=0.99999）,最低检出限8.25ng,平均回收率99.71%,RSD0.30%。结论此法准确度、精密度好,可用于测定硫酸阿托品滴眼液的含量和有关物质。