用suc2信号肽捕获系统筛选小鼠胚胎cDNA文库基因

• 作 者: 孙强 黄红艳 周鹏 冯蕾 秦红 韩骅
• 机 构: 第四军医大学遗传学与发育生物学教研室唐都医院干细胞研究中心西安710032,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室唐都医院干细胞研究中心西安710032
• 出 处: 中国生物化学与分子生物学报
• 发表日期: 2004年4期
• 关键词: cDNA文库筛选 非编码RNA 蛋白质分泌 cDNA library screening noncoding RNA protein secretion
• 基金项目: 国家重点基础研究发展规划项目资助 (项目编号 :2 0 0 1CB5 0 990 0 ,子课题编号 :0 0 1CB5 0 990 6)~~

PCR扩增11d小鼠胚胎cDNA文库插入片段，将0．5～2、0kb的扩增产物插入筛选栽体的多克隆位点，转化suc2基因缺陷酵母宿主菌．然后将约10’个酵母菌落接种于选择性平板上进行筛选，得到了182个可在选择性培养基上生长的菌落．PCR扩增显示，插入片段大小分布于0．1～1．5kb之间．对其中14个阳性菌落的重组子进行序列测定，分别代表6种不同的基因序列，与报告基因都有正确的读框内融合．其中两种基因序列反复被筛到，分别命名为spt1、spt2．spt1[gi：27728766]，可能以非编码RNA的身份参