砷酸氢钠对人肝星状细胞凋亡和自噬的影响

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[背景]肝星状细胞是肝脏主要的效应细胞,其活化被认为是促进肝纤维化发展的主要机制之一.自噬和凋亡在肝星状细胞的激活中起关键作用.[目的]探讨砷酸氢钠(Na2HAsO4)对人肝星状细胞(LX-2细胞)凋亡和自噬的影响.[方法]体外培养LX-2细胞株,使用红色荧光蛋白(RFP)-绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白轻链3(LC3)慢病毒稳定感染LX-2细胞,采用流式细胞仪进行筛选和感染率的测定.用不同浓度Na2HAsO4(0、0.6、6、60μmol·L-1)孵育慢病毒稳定感染的LX-2细胞,同时设立未经慢病毒感染正常培养的LX-2细胞为空白组.采用CCK-8法检测LX-2细胞活性;采用流式细胞仪检测LX-2细胞凋亡;采用实时荧光定量PCR和Western blottng检测自噬指标[LC3、重组人自噬效应蛋白(Beclin-1)、泛素结合蛋白P62(SQSTM-1/P62)]以及凋亡指标[B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)].[结果]RFP-GFP-LC3慢病毒稳定感染后,LX-2细胞慢病毒感染率为70%,在激光共聚焦下观察RFP和GFP的荧光强度无明显差异.Na2HAsO4处理LX-2细胞24、48、72 h后,与Na2HAsO4(0μmol·L-1)比较,除LC3+Na2HAsO4(0μmol·L-1)组外,其余各剂量组细胞抑制率均升高(P<0.05).随着Na2HAsO4染毒剂量的增加,凋亡率呈上升趋势,且与Na2HAsO4(0μmol·L-1)组相比,差异均有统计学意义(P<0.05).各组间LC3(F=5.64,340.66)、Beclin-1(F=20.59,87.70)、SQSTM-1/P62(F=15.91,107.24)、BCL-2(F=113.29,9.41)mRNA和蛋白表达水平差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论]Na2HAsO4可诱导LX-2细胞发生细胞凋亡和自噬,凋亡和自噬之间可能存在拮抗作用.
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