【摘 要】
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目的 研究沙培林治疗裸鼠脑胶质瘤基因的PCR检测.方法 16只BALB/C裸小鼠皮下接种U251脑胶质瘤成功后随机分为4组,每组四只.接种后10 d,肿瘤长至约3～4 mm大小时开始给药,对照组
【机 构】
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上海复旦大学附属华山医院神经外科,山东省济宁市第一人民医院神经外科,上海瑞金医院骨科研究所,上海市肿瘤研究所,山东鲁抗医药集团动物实验室
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目的 研究沙培林治疗裸鼠脑胶质瘤基因的PCR检测.方法 16只BALB/C裸小鼠皮下接种U251脑胶质瘤成功后随机分为4组,每组四只.接种后10 d,肿瘤长至约3～4 mm大小时开始给药,对照组0.2 ml生理盐水,低剂量组沙培林0.2 KE、中剂量组0.4 KE、高荆量组0.8 KE,隔日1次,瘤周注射.给药8次后解瘤实验.从组织中提取总RNA,取20 mg组织加液氮,匀浆研磨,加入TRIZOL裂解液1 ml,采用一步法抽取总RNA,经由紫外分光光度计比色鉴定RNA纯度与浓度,结果 在1.9～2.0之间.逆转录(RT):各取总RNA 1.5、、μg,在终体积为20μl反应条件下,-37℃逆转录1 h,-94℃预变性5 min,获得单链cDNA模板.PCR:各取模板cDNA 2μl,据不同检测对象设计引物,分别进行终体积为30μl的PCR反应,扩增30～50个循环.结果 不同组U251瘤细胞Fas、Bc1-2、Bcl-x、Bax、P53的mRNA从左至右依次为C1、C2、L1、L2、M1、M2、H1、H2、Marker,Bcl-2及P53(突变型)的表达由C至L、M、H逐渐下降,而Bax、Fas及Bcl-xs的表达则又由C至L、M、H逐渐升高.结论 不同基因rt-PCR的检测结果 同样证实了沙培林对脑胶质瘤患者瘤细胞凋亡的调控作用.它是通过上调促凋亡基因Bax、Fas、Bcl-xs及下调抗凋亡基因Bcl-2、P53(突变型)而发挥杀伤瘤细胞、抑制其生长的.
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