可溶性肿瘤坏死因子-α的高效表达及其抗体的制备

• 作 者: 尹丙姣 姜晓丹 李卓娅 龚非力 孙义敏
• 机 构: 华中科技大学同济医学院免疫学研究所,华中科技大学同济医学院免疫学研究所,华中科技大学同济医学院免疫学研究所,华中科技大学同济医学院免疫学研究所,华中科技大学同济医学院免疫学研究所 武汉430030,武
• 出 处: 同济医科大学学报
• 发表日期: 2001年01期
• 关键词: 抗体滴度 抗体特异性 免疫检测 原核表达载体 编码基因 鼠源性 重组蛋白 原核表达系统 免疫调节作用 抗原决定簇

为了制备 TNF-α特异性抗体 ,用 PCR的方法克隆出 TNF-α片段的编码基因并将之插入 PET- 2 8a (+)原核表达载体 ,成功地在大肠杆菌中获得 5 0 %～ 6 0 %的高效表达。经 SDS- PAGE电泳 ,切下 TNF-α特异条带 ,直接免疫大白兔 ,制备出 TNF-α特异性抗体 ,抗体的效价可达 1∶ 6 40 0。利用该抗体成功地检测出 m TNF- NIH3T3细胞膜上的跨膜型 TNF-α的表达情况。结果表明 :制备出的抗体具有较高的特异性 ,对 TNF-α的免疫检测具有重要应用价值

In order to prepare TNF-α-specific antibodies, the gene encoding TNF-α fragment was cloned by PCR and inserted into the prokaryotic expression vector PET-2 8a (+). Successfully 50% ~ 60 % Of the high expression. After SDS-PAGE electrophoresis, specific bands of TNF-α were excised and directly immunized rabbits to prepare TNF-α-specific antibodies with antibody titer up to 1:40. The antibody was used to successfully detect the expression of membrane-bound TNF-α on membrane of mTNF-NIH3T3 cells. The results showed that the prepared antibody has high specificity and is of great value in the immunoassay of TNF-α