TNFAIP1基因过表达载体的构建及其慢病毒包装

• 作 者: 丰昀 彭文婷 黄凤鑫 周芸羽 蒋乐龙 张敏 王光伟
• 机 构: 410004 长沙市中心医院眼科；418000 湖南省怀化市脑与神经内分泌重点实验室,418000 湖南省怀化，湖南医药学院临床医学院,418000 湖南省怀化，湖南医药学院临床医学院,418000
• 出 处: 中国医师杂志
• 发表日期: 2018年20期
• 关键词: Tumor necrosis factor-alpha induced protein 1/GE Gene expression Genetic vectors

目的

构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白1(TNFAIP1)基因过表达慢病毒载体并检测其体外表达水平。

方法

通过PCR扩增TNFAIP1的序列，双酶切线性化pEZ-Lv105载体后与TNFAIP1片段连接，转化至大肠杆菌stbl3中进行筛选，并进行TNFAIP1-Lv105阳性克隆的测序和鉴定。将TNFAIP1-Lv105与HIV包装质粒混合物共转染于293T细胞，收集上清并浓缩，获得慢病毒浓缩液。

结果

测序结果与设计序列一致，测定病毒浓缩液滴度为2×10⁸ TU/ml。

结论

成功构建过表达TNFAIP1的慢病毒载体，为研究TNFAIP1在视神经胶质瘤中的作用提供了分子工具。