【摘 要】
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目的 探究宫颈腺癌细胞中HPV18-E7介导的上皮间质化(EMT)与抑癌基因Rb之间的关系.方法 针对HPV18-E7的siRNA转染入人宫颈腺癌HeLa细胞运用Realtime PCR技术、免疫印迹实验在m
【机 构】
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新疆维吾尔自治区人民医院妇科,乌鲁木齐,830000;
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目的 探究宫颈腺癌细胞中HPV18-E7介导的上皮间质化(EMT)与抑癌基因Rb之间的关系.方法 针对HPV18-E7的siRNA转染入人宫颈腺癌HeLa细胞运用Realtime PCR技术、免疫印迹实验在mRNA水平和蛋白水平检测E7与Rb的表达变化;Real-time PCR技术筛选特异性针对Rb基因的siRNA,并将其转染入HeLa-siE7细胞运用免疫印记实验检测EMT相关的标记因子的表达变化,CCK-8细胞增殖实验和免疫荧光染色法检测细胞增殖能力及细胞骨架的变化;最后用染色质免疫沉淀和real-time PCR技术检测Rb是否通过作用于E-cadherin基因的启动子区来发挥调控其表达的作用.结果 HeLa-siE7细胞内Rb表达较对照组细胞显著上调;HeLa-siE7-siRb细胞较HeLa-siE7细胞E-cadherin的表达明显下调,vimentin的表达却显著上调;HeLa-siE7-siRb细胞增殖能力显著增强;沉默E7表达后细胞失去极性,呈卵圆形,而在沉默E7表达的基础上沉默Rb后,细胞又重新获取细胞极性变回梭形;染色质免疫沉淀实验结果表明抑癌基因Rb可直接作用于上皮性标记因子E-cadherin的启动子区.结论 HPV18-E7能够结合抑癌基因Rb使其失去活性从而致使其无法绑定在上皮标记因子E-cadherin启动子区来调控其表达,最终导致宫颈腺癌发生EMT,促进肿瘤发生侵袭转移.
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