【摘 要】
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多铜氧化酶(Multicopper oxidase,MCO)家族中的某些酶可以通过氧化反应降解食品中的胺类危害物生物胺.然而酶在催化时因为持续被氧化可能会影响整个反应过程中MCO的活性及稳定性,使酶的催化效率和降解生物胺的能力下降.文中成功在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中构建并表达了来源于发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum的多铜氧化酶(MCOF)与枯草芽孢杆菌过氧化氢酶(CAT)的融合酶.8种融合酶对H2O2的耐受性提高了51％-68％,融合酶CAT&
【机 构】
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江南大学未来食品科学中心,江苏无锡214122;江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122
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多铜氧化酶(Multicopper oxidase,MCO)家族中的某些酶可以通过氧化反应降解食品中的胺类危害物生物胺.然而酶在催化时因为持续被氧化可能会影响整个反应过程中MCO的活性及稳定性,使酶的催化效率和降解生物胺的能力下降.文中成功在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中构建并表达了来源于发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum的多铜氧化酶(MCOF)与枯草芽孢杆菌过氧化氢酶(CAT)的融合酶.8种融合酶对H2O2的耐受性提高了51％-68％,融合酶CAT&MCOF在降解组胺的过程中稳定性比MCOF提高了17.3％.以2,2\'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(2,2\'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sul fonic acid),ABTS)为底物时,CAT&MCOF对底物的亲和力(Km)提高了1.0倍,催化效率(Kcat/Km)提高了1.7倍,摩尔比酶活提高了1.2倍,且在酸性(pH 2.5-4.5)和中高温(35-55℃)条件下的稳定性都有不同程度的提高.此外,CAT&MCOF对腐胺、尸胺和组胺的降解率分别为31.7％、36.0％和57.8％,分别比MCOF提高了132.5％,45.7％和38.9％.多铜氧化酶与过氧化氢酶融合表达提高酶催化稳定性和催化效率的策略将为通过酶的分子改造提高其应用特性提供参考.
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