【摘 要】
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目的 探讨生长分化因子7(growth differentiation factor 7,GDF-7)在体外能否促进BMSCs向肌睫细胞分化,为改善BMSCs修复肌腱疗效提供依据. 方法 采用密度梯度离心法从绿荧光
【机 构】
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解放军总医院骨科(北京,100853);香港中文大学威尔斯亲王医院骨科
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目的 探讨生长分化因子7(growth differentiation factor 7,GDF-7)在体外能否促进BMSCs向肌睫细胞分化,为改善BMSCs修复肌腱疗效提供依据. 方法 采用密度梯度离心法从绿荧光大鼠骨髓组织中分离培养BMSCs,通过成骨、成脂和成软骨分化鉴定其多向分化能力.取第3代BMSCs根据成肌腱培养液中加入不同浓度GDF-7(0、12.5、25.0、50.0 ng/mL),分为A、B、C、D组.体外诱导培养2周后,实时荧光定量PCR检测各组scleraxis、tenomodulin、tenascin C和Ⅰ型胶原mRNA表达,免疫细胞化学染色观察tenomodulin、tenascin C和Ⅰ型胶原蛋白表达,Western blot法检测A、C组tenomodulin蛋白的表达. 结果 经鉴定,分离培养的BMSCs具有成骨、成脂和成软骨分化的多向分化能力.实时荧光定量PCR检测结果示,B、C、D组的tenomodulin mRNA表达分别较A组增加了2.85、3.41、3.07倍(P＜0.05),scleraxis mRNA表达增加了2.13、1.50、2.56倍(P＜0.05),tenascinC mRNA表达增加了2.45、2.86、1.88倍(P＜0.05),但B、C、D组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).B、C组Ⅰ型胶原mRNA表达较A组分别增高了1.92和2.45倍(P＜0.05)；D组较A组有所增高,但差异无统计学意义(P＞0.05).免疫细胞化学染色示,B、C、D组均有tenomodulin、tenascinC和Ⅰ型胶原蛋白表达,而A组均未表达；除C组Ⅰ型胶原表达高于B、D组外,其他蛋白表达B、C、D组间无明显差异.Western blot检测示C组比A组有更高的tenomodulin蛋白表达. 结论 GDF-7在体外能促进大鼠BMSCs向肌腱细胞分化.
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