弓形虫核苷三磷酸水解酶-Ⅱ真核表达质粒的构建与鉴定

• 作 者: 陈镭 李成朋 陈弟 赵徐寒晖 蒋凯 林佳鑫 刘阳阳 胡昕 谭
• 机 构: 温州医科大学第一临床医学院,温州医科大学生命科学学院检验医学院,温州医科大学基础医学院
• 出 处: 中国人兽共患病学报
• 发表日期: 2015年6期
• 关键词: 刚地弓形虫 核苷三磷酸水解酶 真核表达 Toxoplasma gondii nucleoside triphosphate hydrolase（NTPase）
• 基金项目: 浙江省科技厅公益性项目（No.2014C33161）, 温州医科大学学生科研项目（No.wyx201301011）联合资助~~

目的构建弓形虫核苷三磷酸水解酶-Ⅱ（NTPase-Ⅱ）基因真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-NTPase-Ⅱ并在COS-7细胞中进行瞬时表达。方法以pBAD-HisB-NTPase-Ⅱ质粒为模板,PCR扩增NTPase-Ⅱ目的基因,将其克隆到pcDNA3.1（＋）真核表达载体中,双酶切及测序鉴定重组质粒。阳离子脂质体法转染COS-7细胞并经SDS-PAGE和Western Blot检测目的蛋白的表达。结果经鉴定,弓形虫pcDNA3.1（＋）-NTPase-Ⅱ核酸疫苗质粒构建成功。以脂质体法转染COS-7