蓝舌病毒选择性诱导肾癌细胞凋亡的研究

来源 :医学分子生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yaki84
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目的:研究蓝舌病毒湖北株( BTV?HbC3)对原代培养二倍体人肾小管上皮细胞( RTECs)、人肾癌细胞(A498)和小鼠肾癌细胞(Renca)的感染特性,并探讨其靶向性杀伤肾癌细胞作用及其机制。方法原代培养二倍体人肾小管上皮细胞( RTECs)并应用透射电镜方法鉴定,以1MOI BTV?HbC3感染RTECs、 A498和Renca细胞48 h后,观察光镜下细胞病变效应和扫描电镜下超微结构变化; MTT检测分别在0?001、0?01、0?1、1和10 MOI的病毒感染RTECs、 A498和Renca3种细胞48 h后的存活率;用流式细胞仪Anexin V/FITC+PI分析1MOI BTV?HbC3感染3种细胞48 h后凋亡情况,并检测A498和Renca细胞感染后的DNA ladder条带;流式细胞仪PI单染法分析感染前后细胞周期的变化;荧光显微镜观察感染后A498和Renca细胞核和内质网的变化。结果成功培养出二倍体的原代人肾小管上皮细胞, BTV?HbC3感染细胞A498和Renca细胞48 h后均出现显著的细胞病变效应,电镜下胞浆中均出现典型的病毒颗粒;而RTECs对病毒不敏感,电镜下形态无变化,胞浆内未见病毒颗粒;10 MOI的BTV?HbC3感染RTECs、 A498和Renca细胞48 h后存活率分别为:(99?25±3?27)%、(25?69±3?50)%和(22?63±5?85)%, A498和Renca细胞与RTECs比较有显著差异(P<0?05);流式细胞仪检测1 MOI的BTV?HbC3感染48 h后RTECs、A498和Renca早期凋亡率分别为(2?0±0?9)%、(52?0±3?4)%、(40?0±2?4)%(P<0?01), A498和Renca细胞呈现典型的凋亡条带。细胞周期检测显示感染后A498和Renca细胞出现了S期阻滞,荧光显微镜观察到A498和Renca细胞核染色质固缩,边聚,内质网出现大量空泡,未感染A498及感染A498细胞内质网荧光值分别为56?396±7?658、33?497±5?836( P<0?01);而感染后Renca内质网也出现空泡,未感染A498及感染A498细胞内质网荧光值分别为70?146±4?754、42?291±6?893(P<0?01)。结论 BTV?HbC3对原代培养二倍体肾小管上皮细胞不敏感,能通过凋亡途径分别诱导 A498和 Renca死亡,证实了BTV?HbC3具有选择性抗肾癌的作用。
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