【摘 要】
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目的:将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体IgG,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性.方法:用
【机 构】
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南京医科大学病理学系,卫生部抗体技术重点实验室,江苏南京211166;南京军区军事医学研究所,江苏南京,210002;南京医科大学第二附属医院耳鼻喉科,江苏南京,210011
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目的:将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体IgG,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性.方法:用H7N9型禽流感病毒血凝素筛选全人源Fab噬菌体抗体库,构建全分子IgG抗体重、轻链表达载体,共转染293 FreeStyle(293F)细胞,表达并纯化IgG抗体.应用ELISA及Western blot实验检测抗体免疫学活性,微量中和实验及鸡胚预防保护实验检测其中和活性,血凝抑制试验判断其结合血凝素亚基.结果:成功筛选出1株全人源抗H7N9血凝素Fab抗体基因并构建IgG真核表达载体.获得的全分子IgG抗体重、轻链序列正确,并可特异性结合H7N9血凝素.微量中和实验证明其对H7N9型禽流感病毒有良好中和活性,中和滴度为15.6 μg/mL.鸡胚预防保护实验显示抗体用量为200 μg时可达100％保护率.血凝抑制试验表明其结合血凝素HA2亚基.结论:制备的重组全人源全分子抗H7N9血凝素IgG抗体可特异性识别H7N9型禽流感病毒血凝素,对H7N9型禽流病毒有显著的中和作用,为进一步研发用于禽流感防治的抗体药物奠定基础.
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