【摘 要】
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目的 探讨抗VEGF抗体及抗VEGF发夹状核酶基因对K562细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响及其分子机制.方法 将不同浓度的VEGF抗体作用于K562细胞,应用脂质体介导的方法将抗VE
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目的 探讨抗VEGF抗体及抗VEGF发夹状核酶基因对K562细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响及其分子机制.方法 将不同浓度的VEGF抗体作用于K562细胞,应用脂质体介导的方法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体pcDNA-RZ转染K562细胞,采用MTT法、甲基纤维素半固体培养法和细胞周期测定分析抗VEGF抗体及发夹状核酶基因对白血病细胞增殖的影响;DNA凝胶电泳和AnnexinV标记法检测白血病细胞的凋亡程度;RT-PCR法测定K562细胞中相关基因表达的变化.结果 抗VEGF抗体能抑制K562细胞生长,促进其凋亡,这一作用呈剂量依赖关系.0.165μg/ml VEGF抗体作用于K562细胞72 h,DNA凝胶电泳出现梯状条带,当抗体浓度增加到0.825μg/ml时,梯状条带更为清晰;RT-PCR显示,VEGF抗体作用后,K562细胞MRP、TOPOⅡ基因的表达较对照组下调,而GST基因表达无明显改变.与K562及K562/PC细胞(转染空质粒的K562细胞)相比,转染抗VEGF核酶基因的K562/RZ细胞VEGF mRNA和蛋白的表达量明显降低;生长曲线提示K562/RZ细胞生长缓慢,甲基纤维素集落形成率较对照组明显下降,对照组集落形成率为(30.5±3.3)%,而K562/RZ组为(16.3±2.8)%,细胞周期动力学分析结果显示K562/RZ细胞G1期细胞增多,S期细胞显著减少;在小剂量As2O3作用下,K562/RZ细胞凋亡数量较对照明显增高(凋亡率对照组为13.4%,K562/RZ组为31.5%).结论 抗VEGF抗体阻断K562细胞VEGF自分泌环路或者抗VEGF发夹状核酶减少K562细胞中VEGF的合成,能抑制K562细胞的增殖,促进K562细胞的凋亡,引起部分与细胞凋亡和多药耐药相关的基因表达改变.
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