【摘 要】
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为了探讨组合添加雌激素和催乳素对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)酪蛋白合成的影响及作用机制,以课题组前期筛选出的最佳雌激素和催乳素浓度为基础,开展组合添加试验.雌激素和催乳素的添加总量为300 ng/mL,根据二者的添加比例分为试验Ⅰ组(对照组,不添加雌激素和催乳素)、试验Ⅱ组(雌激素∶催乳素=5∶1)、试验Ⅲ组(雌激素∶催乳素=2∶1)和试验Ⅳ组(雌激素∶催乳素=1∶2).采用MTT法检测细胞增殖情况;qRT-PCR法检测酪蛋白合成、mTOR信号通路和JAK2-STAT5信号通路相关基因表达情况;蛋白印迹
【机 构】
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内蒙古农业大学动物科学学院,动物营养与饲料科学自治区高等学校重点实验室,呼和浩特010018
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为了探讨组合添加雌激素和催乳素对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)酪蛋白合成的影响及作用机制,以课题组前期筛选出的最佳雌激素和催乳素浓度为基础,开展组合添加试验.雌激素和催乳素的添加总量为300 ng/mL,根据二者的添加比例分为试验Ⅰ组(对照组,不添加雌激素和催乳素)、试验Ⅱ组(雌激素∶催乳素=5∶1)、试验Ⅲ组(雌激素∶催乳素=2∶1)和试验Ⅳ组(雌激素∶催乳素=1∶2).采用MTT法检测细胞增殖情况;qRT-PCR法检测酪蛋白合成、mTOR信号通路和JAK2-STAT5信号通路相关基因表达情况;蛋白印迹法检测细胞中α酪蛋白和β酪蛋白水平.结果显示,与对照组相比,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均显著增加了BMECs的增殖率,提高了BMECs中CSN1S1、CSN3、AMPK、PI3K、AKT、mTOR、eIF4E、JAK2、STAT5、ERβ和PRLR的基因表达水平(P＜0.05);试验Ⅲ组和试验Ⅳ组显著提高了BMECs中CSN2的基因表达水平(P＜0.05).与对照组相比,试验Ⅱ组和Ⅳ组显著增加了 BMECs的α酪蛋白和β酪蛋白表达量(P＜0.05),其中α酪蛋白的表达量分别提高了22.7％和38.6％,β酪蛋白的表达量分别提高了62.9％和102.9％.试验Ⅲ组β酪蛋白的表达量显著高于对照组(P＜0.05),而α酪蛋白表达量与对照组无显著差异.综合细胞增殖和酪蛋白表达的结果,组合添加100 ng/mL雌激素和200 ng/mL催乳素的试验Ⅳ组对BMECs酪蛋白合成的促进效果最佳.
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