【摘 要】
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目的:探讨miRNA let-7i-5p在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织中的表达水平及其对RCC细胞769-P的增殖、迁移、侵袭和透明质酸结合蛋白4 (hyaluronan-binding protein4,HABP4)表达的影响.方法:利用TCGA RCC数据库及GEO数据库对let-7i-5p在RCC组织中的表达进行meta分析.体外常规培养人RCC细胞769-P并对其进行转染,根据转染物不同分为过表达组(转染let-7i-5p模拟物)、抑制组(转染let-7i-5p
【机 构】
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西南医科大学附属医院全科医学科,四川泸州646000;西南医科大学附属医院老年医学科,四川泸州646000
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目的:探讨miRNA let-7i-5p在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织中的表达水平及其对RCC细胞769-P的增殖、迁移、侵袭和透明质酸结合蛋白4 (hyaluronan-binding protein4,HABP4)表达的影响.方法:利用TCGA RCC数据库及GEO数据库对let-7i-5p在RCC组织中的表达进行meta分析.体外常规培养人RCC细胞769-P并对其进行转染,根据转染物不同分为过表达组(转染let-7i-5p模拟物)、抑制组(转染let-7i-5p抑制物)和对照组(转染NC序列).采用CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验及WB法检测let-7i-5p对769-P细胞增殖活力、划痕愈合率、穿膜侵袭细胞数及HABP4表达水平的影响.双荧光素酶报告基因实验验证let-7i-5p与HABP4 mRNA的靶向关系.结果:分析TCGA RCC数据库及5个GEO数据集(GSE23085、GSE47582、GSE95385、GSE16441和GSE71302)中数据结果显示,let-7i-5p在RCC组织中的表达水平显著高于正常肾组织(均P＜0.05).体外实验结果显示,与对照组相比,过表达组在24、48及72 h时细胞增殖活力显著升高,而抑制组显著降低(均P＜0.01);过表达组的划痕愈合率[(37.276±2.058)％vs(15.663±2.949)％,P＜0.01]和穿膜侵袭细胞数[(377.000±34.044) vs(255.667±25.384)个,P＜0.01]均显著升高,而抑制组的划痕愈合率[(8.791±2.568)％vs(15.663±2.949)％,P＜0.05]和穿膜侵袭细胞数[(170.333±14.978)vs(255.667±25.384)个,P＜0.01]均显著降低.在野生型HABP4-3\'URT质粒组中,过表达let-7i-5p可显著抑制细胞的荧光素酶活性(P＜0.01);而在突变型HABP4-3\'URT质粒组中,过表达let-7i-5p对细胞的荧光素酶活性无影响(NS,P＞0.05).WB检测结果显示,与对照组相比,过表达组的HABP4和E-cadherin的水平均降低(均P＜0.01)、CDK2的水平升高(P＜0.01),而抑制组则相反(均P＜0.01).结论:Let-7i-5p在RCC组织中呈高表达,其可能通过靶向HABP4基因来促进769-P细胞的增殖、迁移和侵袭.
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