丁酸钠诱导人凝血因子Ⅷ的体外表达

• 作 者: 尹俊 王鸿利 王学锋 储海燕 李稻 陈红兵 傅启华 段宝华 康文英 丁秋兰 戚正武 王振义
• 机 构: 上海第二医科大学瑞金医院、上海血液学研究所,上海市医学检验重点实验室,中国科学院上海生物化学研究所,
• 出 处: 中华血液学杂志
• 发表日期: 2002年23期
• 关键词: 丁酸钠 体外表达 基因表达 人凝血因子Ⅷ 血液凝固因子Ⅷ 检测细胞培养 质粒载体 重链 细胞生长 反应技术

目的观察丁酸钠对人凝血因子Ⅷ(hFⅧ)表达的作用,并初步探讨其机制.方法采用B区缺失(760～1 639氨基酸)的hFⅧ cDNA(BDD-hFⅧ cDNA)的重组质粒载体pRC/RSV-BDD-hFⅧ转化体外培养的小鼠NIH/3T3细胞,经丁酸钠作用后,分别采用一期法和ELISA法检测细胞培养上清中hFⅧ的活性(hFⅧ∶C)和抗原含量(hFⅧ∶Ag),并运用体外细胞核连缀反应技术(Run-on assay)观察丁酸钠对编码BDD-hFⅧ全长、重链和轻链的cDNA转录的影响.结果经丁酸钠诱导后,hFⅧ∶C和hFⅧ∶Ag较对照组提高了约70%.Run-on assay显示丁酸钠通过增强BDD-hFⅧ重链基因的转录进而增强BDD-hFⅧcDNA全长的转录,因而提高hFⅧ cDNA的表达水平.结论丁酸钠通过增强编码hFⅧ重链cDNA的转录进而提高hFⅧ的表达水平,因而是一个很有前途的诱导hFⅧ表达的化学物.