重组人VEGF165蛋白在毕赤酵母中高效表达与多克隆抗体的制备

• 作 者: 王晓 黄晓平 周宇 刁勇
• 机 构: 华侨大学分子药物研究院,华侨大学生物医学学院
• 出 处: 华侨大学学报：自然科学版
• 发表日期: 2014年6期
• 关键词: 重组人VEGF165蛋白 多克隆抗体 毕赤酵母 高效表达 rhVEGF165 proteinpolyclonal antibodyPichia pastoris
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（81271691）,国际科技合作项目（2011DFG33320）,福建省科技重大项目（2013N5007）,华侨大学科研基金资助项目（11HZR19）

构建 pPIC9K-VEGF165分泌型载体，线性化后电击转化至 GS115（his4）中，经最小葡萄糖培养基（MD 平板）筛选出阳性表达菌株并进行聚合酶链式反应（PCR）验证．菌株发酵上清液经 Sephadex G-25，Hep-arin Sepharose FF 和 Sephacryl S-100层析介质分离纯化，目的蛋白纯度达到95％，相对分子质量约为24ku．结果表明：重组人 VEGF165蛋白能诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖，提高 HUVEC 细胞的活性；重组人VEGF165蛋白免疫小鼠