DnaB Split Intein高表达载体及其介导的环肽库构建

• 作 者: 蔺增曦 王胜兰 杨秀山 杨克迁
• 机 构: 首都师范大学,中国科学院微生物研究所
• 出 处: 生物工程学报
• 发表日期: 2008年11期
• 关键词: SPLIT SSP DNAB mini—intein 环肽库 自我剪接 split Ssp DnaB mini-intein cyclic peptide
• 基金项目: 致谢衷心感谢中国科学院微生物研究所田秀云、徐新平在克隆筛选与蛋白表达上给予的帮助,以及范可强老师在环肽检测条件上的建议与指导.

以pET28a为起始质粒，构建高表达DnaB split intein的重组质粒。将质粒pVmut上的编码Intc—dnaB—N—IntN片段克隆至pET28a，得到表达载体pEV．在T7启动子的作用下可使融合DnaB split intein大量表达；并在split intein介导下发生催化DnaB—N的剪接反应，生成环化的DnaB—N蛋白。将合成的包含随机编码5肽的大小为115bp的片段插入质粒pEVDnaB—N位置，转化大肠杆菌后得到一个编码含有6肽（含5个随机氨基酸和1个Cys）的包含约10^3