兔抗人ERA抗血清的制备

• 作 者: 张俊杰 吴元明 刘慧萍 纪宗玲 陈南春 陈苏民
• 机 构: 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安市长乐西路17 陕西西安710032,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安市长乐西路17 陕西西安710032,第四军医大学生物化学与分子生物学教研
• 出 处: 细胞与分子免疫学杂志
• 发表日期: 2001年01期
• 关键词: 人ERA 原核表达 抗血清

目的在大肠杆菌中表达人ＥＲＡ蛋白（ｈ－ＥＲＡ）和ｈ－ＥＲＡ Ｃ端结构域蛋白，并制备兔抗ｈ－ＥＲＡ抗血清。方法以 ＰＣＲ扩增人ｅｒａ基因（ｈ－ｅｒａ）全长ｃＤＮＡ和 ｈ－ＥＲＡ Ｃ端的结构域基因，并分别克隆到（Ｈｉｓ）６融合表达载体ＰＲＳＥＴ－Ｃ和非融合表达载体ｐＤＨ中，诱导表达（Ｈｉｓ）６－ｈ－ＥＲＡ融合蛋白和ｈ－ＥＲＡ Ｃ端结构域蛋白。用 ｈ－ＥＲＡ Ｃ端结构域蛋白免疫兔，制备兔抗ｈ－ＥＲＡ抗血清，并以Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ对免抗ｈ－ＥＲＡ抗血清进行鉴定。结果大肠杆菌中表达的ｈ－ＥＲＡ Ｃ端结构域蛋白和（Ｈｉｓ）６－ｈ－ＥＲＡ融合蛋白，分别占菌体总蛋白的４０％和８０％。用兔抗血清可检出大肠杆茵中表达的（Ｈｉｓ）６－ｈ－ＥＲＡ融合蛋白。结论 ｈ－ＥＲＡ和 ｈ－ＥＲＡ Ｃ端结构域蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，并成功地制备了兔抗ｈ－ＥＲＡ抗血清。