【摘 要】
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目的通过构建一种新型腺病毒载体,验证肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL基因)治疗胶质瘤的疗效,并证实新型载体的优势。方法经美国华盛顿大学实验室授权获得Ad/35△E1-△E
【机 构】
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青岛大学医学院附属医院神经外科,宿迁市第一人民医院神经外科,即墨市人民医院神经外科,青岛大学医学院附属医院中心实验室,焦作市人民医院神经外科
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目的通过构建一种新型腺病毒载体,验证肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL基因)治疗胶质瘤的疗效,并证实新型载体的优势。方法经美国华盛顿大学实验室授权获得Ad/35△E1-△E3,即E1和E3缺失的5型腺病毒纤维fiber被35型新型载体。利用基因重组,构建出重组腺病毒质粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL。氯化铯密度梯度离心纯化Ad5/35△E1-△E3-TRAIL,并并测定病毒滴度。采用逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光技术、蛋白质印迹法(Western blot)分别检测目的基因的表达。结果纯化后Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的病毒滴度为1.22×1015pfu/l。重组质粒经RT-PCR都扩增出104 bp的基因片段。通过免疫荧光和Western blot等方法检测到目的基因的高效表达。结论新型腺病毒载体质粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL能够高效的在脑胶质瘤细胞中表达。
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