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目的:开发优化破伤风梭菌无动物源培养基;摸索层析法纯化破伤风毒素的工艺。方法:分别用蛋白胨和酵母浸出物替代培养基中动物源性成分作为氮源。2 L发酵罐发酵比较菌体生长密度和产毒量;发酵液经离心,切向流过滤回收,通过柱层析方法对发酵回收液进行纯化。柱层析时比较不同洗脱条件下毒素回收率。结果:蛋白胨可更好的供菌体生长,但产毒量较低;酵母浸出物可作为氮源供菌体生长,菌体浓度相对较低,但最高产毒量可达52 Lf·m L-1;阴离子柱层析纯化可使破伤风毒素纯度大幅提高,毒素回收率在80%左右。结论:无动物源培养基发酵破伤风梭菌有高产毒量,阴离子柱层析可作为破伤风毒素纯化方法。