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目的
评价吗啡对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。
方法实验Ⅰ 人肝癌细胞以2×105个/孔接种于6孔板中(2 ml /孔),采用随机数字表法,将细胞分为6组(n=12):对照组(C组)、10 ng/ml吗啡组(M1组)、25 ng/ml吗啡组(M2组)、50 ng/ml组(M3组)、100 ng/ml(M4组)和200 ng/ml(M5组),M1组-M5组加入相应终浓度的吗啡,C组使用等量PBS处理,培养或孵育48 h。采用Real-time PCR法检测μ1阿片受体(MOR1)mRNA的表达。C组和M4组采用Western blot法测定MOR1的表达。实验Ⅱ 人肝癌细胞接种于96孔培养板(1×103个/孔)或Transwell小室(200 μl)。采用随机数字表法分为2组(n=9):对照组(C组)和吗啡组(M组)。M组加入吗啡,终浓度100 ng/ml, C组加入等量PBS,终体积为100 μl/孔。于孵育或培养第1~7天时采用MTT法测定细胞增殖能力。于孵育或培养30 h时采用Transwell法检测细胞迁移能力。
结果实验Ⅰ 与C组比较,M1组-M5组MOR1 mRNA表达上调,M4组MOR1表达上调(P<0.01)。与M4组比较,M1组-M3组、M5组MOR1 mRNA表达下调(P<0.01)。实验Ⅱ 与C组比较,M组孵育第4~7天时细胞增殖能力增强,穿过Transwell小室的细胞计数升高(P<0.05或0.01)。M组孵育第4~7天细胞增殖能力逐渐增强(P<0.05)。
结论吗啡可促进人肝癌细胞增殖和迁移,机制与上调MOR1表达有关。