【摘 要】
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目的 建立一种针对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）辅助耐药基因femB的实时荧光重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）技术检测方法，并评价其灵敏度、特异性以及实用性。方法 针对femB特异基因设计RPA候选扩增引物以及RPA荧光探针，设置同一浓度的阳性质粒浓度筛选出最优的RPA扩增引物，建立SA的实时荧
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目的 建立一种针对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）辅助耐药基因femB的实时荧光重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）技术检测方法，并评价其灵敏度、特异性以及实用性。方法 针对femB特异基因设计RPA候选扩增引物以及RPA荧光探针，设置同一浓度的阳性质粒浓度筛选出最优的RPA扩增引物，建立SA的实时荧光RPA（exo-RPA）检测方法，并设置SA基因组DNA浓度梯度测试该检测方法的灵敏度；选用11种其他致病菌基因组DNA测试方法特异性。最后模拟临床血液样本比较该法与qPCR检测方法的阳性检出率，评价方法的实用性。结果 SA-exo-RPA检测方法在39℃反应温度下，5～10 min内可快速检出最低浓度为1 amol/L（3.82 fg）的SA基因组DNA，且特异性高，与其他致病菌无交叉反应。模拟临床血液样本阳性检出率与已发表文献中qPCR检测方法一致，不受样本中复杂成分的非靶标核酸干扰。结论 该研究建立的SA-exo-RPA检测方法具有快速、高灵敏度和高特异性的优点，可应用于SA的现场快速检测。
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