【摘 要】
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目的研究肾周白色脂肪组织作为内分泌器官是否以外泌体囊泡作为运载体调控大鼠动脉血压。方法采用成年自发性高血压大鼠（spontaneouslyhypertensiverat，SHR）和正常血压的Wistar-Kyoto（WKY）大鼠。将WKY大鼠和SHR的肾周白色脂肪置于无血清（无外泌体）培养基中培养，使用外泌体分离提取试剂盒（exoEasyMaxiKit）分离分泌囊泡。经纳米粒径测定、透射电镜和表面
【基金项目】
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山东省自然科学基金（ZR2018MC011）；
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目的研究肾周白色脂肪组织作为内分泌器官是否以外泌体囊泡作为运载体调控大鼠动脉血压。方法采用成年自发性高血压大鼠（spontaneouslyhypertensiverat，SHR）和正常血压的Wistar-Kyoto（WKY）大鼠。将WKY大鼠和SHR的肾周白色脂肪置于无血清（无外泌体）培养基中培养，使用外泌体分离提取试剂盒（exoEasyMaxiKit）分离分泌囊泡。经纳米粒径测定、透射电镜和表面标志物鉴定符合外泌体囊泡（Exosomes，Exo）特征后用于后续实验。SHR或WKY大鼠各随机分为两组，分别尾静脉注射SHR大鼠外泌体（Exo-SHR）或WKY大鼠外泌体（Exo-WKY），每周1次，连续6周。在清醒状态下使用无创尾动脉加压系统测量动脉血压，每周1次。注射后第6周末进行急性实验。采用颈动脉插管法进行动脉血压直接测定，采用HE染色和Masson染色观察心血管病理重构。外周交感神经张力（peripheralsympathetictone，PST）高低以静脉注射盐酸六烃季铵引起的降压反应与Exo-WKY处理的WKY大鼠的降压反应的比值大小表示。另外，PKH67绿色荧光染料标记外泌体后尾静脉注射进行体内示踪，与原代培养的神经元孵育进行体外示踪。结果肾周白色脂肪组织分泌的外泌体囊泡经透射电镜观察到典型外泌体半托杯状囊泡结构，纳米粒径检测平均直径集中在100nm左右，且具有表面特异标志物肿瘤易感基因101（Tumorsusceptibilitygene，TSG101）和白细胞分化9（Clusterofdifferentiation9，CD9）表达。SHR组收缩压（Systolicbloodpressure，SBP）在注射Exo-WKY后的第2周开始下降，并在整个干预过程中保持低于注射前的水平（P＜0.05）。应用Exo-WKY可减少SHR心肌细胞横截面积、主动脉中膜厚度及降低PST（P＜0.05）。而WKY大鼠应用Exo-SHR后，SBP、心肌细胞横截面积、主动脉中膜厚度及PST均未见明显变化（P＞0.05）。在体示踪发现PKH67标记外泌体囊泡经尾静脉注射24h后，在下丘脑室旁核（paraventricularnucleus，PVH）、孤束核（nucleustractssolitary，NTS）、延髓头端腹外侧部（rostralventrolateralmedulla，RVLM）可见绿色荧光。体外示踪发现培养神经元也可见绿色荧光。结论这些结果表明，肾周白色脂肪组织源外泌体可作为运载体发挥远距离调控动脉血压的作用。SHR-Exo缺乏抑制血压升高的内容物，补充WKY-Exo可降低动脉血压和交感紧张，并改善心血管重构。
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