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【摘要】 目的： 建立清熱化毒丸质量控制方法；方法：采用高效液相色谱法测定处方中黄芩药材黄芩苷的含量，结果：方法可行；结论：方法简便、准确、专属性强、重现性好。
【关键词】 清热化毒丸；高效液相色谱法
清热化毒丸收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册，是由连翘、青黛、黄连、黄芩、大黄、 菊花等十五味药材组成。具有清火化毒，消肿止痛功效。用于小儿身热烦燥，咽喉肿痛，口舌生疮，皮肤疮疖，口臭便秘，疹后余毒末尽。临床实践表明，该制剂疗效确切。但该标准在质量控制方面只有两项薄层鉴别，不能有效的控制产品质量，因此，对该制剂质量控制方法进行实验研究。
1 仪器与试药
仪器：高效液相色谱仪试药：黄芩苷 中国药品生物制品检定所试剂：甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂为分析纯。
2 高效液相色谱法鉴别黄芩苷及结果
拟采用高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D），测定本品中黄芩苷的含量。
2.1 检测波长的确定：取黄芩苷的甲醇溶液，进行紫外吸收扫描，测得黄芩苷的最大吸收值为 315nm，故以315nm确定为黄芩苷的测定波长。
2.2 提取方法的选定
2..21 取本品约1g，精密称定（取三份等量供试品），分别加70%乙醇30ml，分别超声处理20分钟、30分钟、40分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。分别进样，测定含量。测定结果见下表
由此可见，超声30分钟时，黄芩苷已基本提取完全。即样品提取时间为30分钟，即得。
2.2.2 取本品约1g，精密称定（取三份等量供试品），分别加60%乙醇，加70%乙醇和80%乙醇各30ml，分别超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。分别进样，测定含量。测定结果见下表
由此可见，用70%乙醇提取，黄芩苷提取的较完全。即样品用70%乙醇提取，即得。
2.3 色谱条件：色谱柱：KromasilC184.6mm×250mm，4.6μm ；流动相：甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）；检测波长：315 nm流速：0.8ml/min
2.4 测定方法及系统适用性试验：对照品溶液的制备 称取黄芩苷对照品，精密称定，加甲醇使成1 ml含30μg 的溶液。作为对照品溶液。
阴性溶液的制备取缺黄芩的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法，同法制备黄芩的阴性对照溶液。
2.5 线性关系试验：照高效液相色谱法试验。精密称取黄芩苷对照品7.8mg，置50量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别稀释成含黄芩苷为3.12μg/ml， 6.24μg/ml，9.36μg/ml，43.68μg/ml，62.4μg/ml的溶液，分别进样（定量环，20μl）测定色谱峰面积，测定以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：
y =1956267x-24313 r=0.9999
由测定结果提示，黄芩苷进样量在0.0624μg～1.248μg范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验：取供试品溶液（20110104），连续进样5次，按前述色谱条件进样分析，测定色谱峰面积，测定结果RSD为1.8%，测定结果表明，精密度试验符合有关规定。
2.7 稳定性试验：取对照品溶液，于室温条件下放置8小时，每隔2小时进样一次，测定峰面积实验结果如下：结果RSD为1.2%。试验结果提示：溶液在8小时内测定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。
2.8 重现性试验考察：取供试品（20110108），按上述拟定的黄芩苷的含量测定方法，平行测定5次，结果RSD为1.4%。结果表明，此方法测定本品中黄芩苷的含量，重现性良好。
2.9 加样回收试验：取已知准确含量的供试品(20110108)内容物约0.5g，共5份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品溶液 [取黄芩苷9.3mg,置10ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀（相当于黄芩苷0.93mg/ml）]1ml,按正文供试品溶液的制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液，并注入液相色谱仪。按下列公式计算回收率：
回收率试验平均回收率99.1%，RSD为1.97%。结果表明回收率良好。
2.10 样品的测定及限度的确定：按上述测定方法，测定3批样品中黄芩苷的含量，结果见下表。
样品中黄芩苷的含量测定结果
3 讨论
清热化毒丸由十五味中药材组成，该检验方法专属性强，重现性好。本实验为制剂质量标准的制定提供了实验依据，可用于该制剂的质量控制。
【关键词】 清热化毒丸；高效液相色谱法
清热化毒丸收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册，是由连翘、青黛、黄连、黄芩、大黄、 菊花等十五味药材组成。具有清火化毒，消肿止痛功效。用于小儿身热烦燥，咽喉肿痛，口舌生疮，皮肤疮疖，口臭便秘，疹后余毒末尽。临床实践表明，该制剂疗效确切。但该标准在质量控制方面只有两项薄层鉴别，不能有效的控制产品质量，因此，对该制剂质量控制方法进行实验研究。
1 仪器与试药
仪器：高效液相色谱仪试药：黄芩苷 中国药品生物制品检定所试剂：甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂为分析纯。
2 高效液相色谱法鉴别黄芩苷及结果
拟采用高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ D），测定本品中黄芩苷的含量。
2.1 检测波长的确定：取黄芩苷的甲醇溶液，进行紫外吸收扫描，测得黄芩苷的最大吸收值为 315nm，故以315nm确定为黄芩苷的测定波长。
2.2 提取方法的选定
2..21 取本品约1g，精密称定（取三份等量供试品），分别加70%乙醇30ml，分别超声处理20分钟、30分钟、40分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。分别进样，测定含量。测定结果见下表
由此可见，超声30分钟时，黄芩苷已基本提取完全。即样品提取时间为30分钟，即得。
2.2.2 取本品约1g，精密称定（取三份等量供试品），分别加60%乙醇，加70%乙醇和80%乙醇各30ml，分别超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。分别进样，测定含量。测定结果见下表
由此可见，用70%乙醇提取，黄芩苷提取的较完全。即样品用70%乙醇提取，即得。
2.3 色谱条件：色谱柱：KromasilC184.6mm×250mm，4.6μm ；流动相：甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）；检测波长：315 nm流速：0.8ml/min
2.4 测定方法及系统适用性试验：对照品溶液的制备 称取黄芩苷对照品，精密称定，加甲醇使成1 ml含30μg 的溶液。作为对照品溶液。
阴性溶液的制备取缺黄芩的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法，同法制备黄芩的阴性对照溶液。
2.5 线性关系试验：照高效液相色谱法试验。精密称取黄芩苷对照品7.8mg，置50量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别稀释成含黄芩苷为3.12μg/ml， 6.24μg/ml，9.36μg/ml，43.68μg/ml，62.4μg/ml的溶液，分别进样（定量环，20μl）测定色谱峰面积，测定以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：
y =1956267x-24313 r=0.9999
由测定结果提示，黄芩苷进样量在0.0624μg～1.248μg范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验：取供试品溶液（20110104），连续进样5次，按前述色谱条件进样分析，测定色谱峰面积，测定结果RSD为1.8%，测定结果表明，精密度试验符合有关规定。
2.7 稳定性试验：取对照品溶液，于室温条件下放置8小时，每隔2小时进样一次，测定峰面积实验结果如下：结果RSD为1.2%。试验结果提示：溶液在8小时内测定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。
2.8 重现性试验考察：取供试品（20110108），按上述拟定的黄芩苷的含量测定方法，平行测定5次，结果RSD为1.4%。结果表明，此方法测定本品中黄芩苷的含量，重现性良好。
2.9 加样回收试验：取已知准确含量的供试品(20110108)内容物约0.5g，共5份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品溶液 [取黄芩苷9.3mg,置10ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀（相当于黄芩苷0.93mg/ml）]1ml,按正文供试品溶液的制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液，并注入液相色谱仪。按下列公式计算回收率：
回收率试验平均回收率99.1%，RSD为1.97%。结果表明回收率良好。
2.10 样品的测定及限度的确定：按上述测定方法，测定3批样品中黄芩苷的含量，结果见下表。
样品中黄芩苷的含量测定结果
3 讨论
清热化毒丸由十五味中药材组成，该检验方法专属性强，重现性好。本实验为制剂质量标准的制定提供了实验依据，可用于该制剂的质量控制。