小干扰RNA体外抑制HBs—GFP融合基因的表达

• 作 者: 羊正纲 陈智 倪勤 徐宁 潘修成 金晗英 李星仪
• 机 构: 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所,浙江大学医学院临床医学系2000级
• 出 处: 浙江大学学报：医学版
• 发表日期: 2005年2期
• 关键词: 肝炎病毒 乙型 RNA/遗传学 RNA干扰 表面抗原 绿荧光蛋白 Hepatitis B virus RNA/genet RNA interference
• 基金项目: 国家自然科学基金，浙江省科技厅资助项目

目的:利用增强型绿荧光蛋白(EGFP)和小发夹RNA(shRNA)表达载体技术,建立一种行之有效且相对经济的验证siRNA的方法.方法:将HBV S基因融合到EGFP中,建立HBs-GFP融合基因表达载体;同时构建带U6+27 RNA转录启动子的shRNA表达载体pAVU6+4sh357.二载体共转染HepG2细胞后,流式细胞仪检测HBs-GFP蛋白的荧光强度;同时RT-PCR和实时定量PCR法检测HBs-GFP mRNA水平的改变.结果:小干扰RNA有效抑制目的基因的表达,共转染后第72 h荧光蛋白抑制