【摘 要】
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Ⅰ型跨膜蛋白在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用。研究对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd74560进行生物信息学分析,选取抗原性强的序列,采用PCR方法扩增出微小隐孢
【机 构】
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吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31772731，31272549）
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Ⅰ型跨膜蛋白在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用。研究对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd74560进行生物信息学分析,选取抗原性强的序列,采用PCR方法扩增出微小隐孢子虫DNA Cgd74560部分基因。将该片段分别连接到p ET-28a和p GEX-4T-1载体,构建重组表达质粒p ET-28a-Cgd74560和p GEX-Cgd74560,并将其转化到大肠埃希氏杆菌BL21（Condon Plus）,IPTG诱导表达获得重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot分析,His标签重组蛋白为31k D,GST标签重组蛋白为53k D。用His标签重组蛋白免疫家兔,间接ELISA方法检测血清抗体效价达到1:16000,成功制备多克隆抗体。采用Western blot方法验证该抗体能够特异性的识别虫体天然蛋白,间接免疫荧光分析该蛋白在子孢子头端,间接ELISA结果表明GST-Cgd74560能与HCT-8细胞粘附,为其功能研究奠定了基础。
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