In—fusion技术构建表达、纯化钠泵α3亚单位膜外区截断性片段重组质粒

• 作 者: 张明娟 杨军 朱参战 段宗明 牛小麟 王蓉 宋雅燔
• 机 构: 西安交通大学医学院第二附属医院心内科,西安交通大学医学院第二附属医院病理科
• 出 处: 四川大学学报：医学版
• 发表日期: 2009年2期
• 关键词: 钠泵α3亚单位 截断性片段GST融合基因表达系统 Sodium pump α3 subunit Truncated fragment GST gene fusi
• 基金项目: 国家自然科学基金（批准号30500204）资助

目的构建重组pGEX-6P-1原核表达载体，表达和纯化大鼠钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区的截断性片段。方法利用In-fusion技术将钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区基因片段插入线性化的pGEX-6P-1载体中，转化，提取质粒，PCR鉴定；用阳性重组质粒pGEX-Trf-α3转化大肠杆菌，IPTG诱导、表达融合蛋白GST—Trf-α3。采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白，SDS-PAGE电泳分析表达产物的可溶性及含量。采用放射性配体结合法检测其生