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摘要 一些现代药理学的研究结果显示，苦参中的苦参碱型生物碱有很好的镇痛消炎作用，其中包括赝靛叶碱。本文介绍了一种从苦参中提取赝靛叶碱的方法，结果表明：收集的赝靛叶碱纯度≥95%。
关键词 苦参；赝靛叶碱；提取
中图分类号 R284.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）20-0252-01
Method for Extracting Pseudo baptifoline from Sophora flavescens
YU Yan 1 WANG Hai-bo 2 *
（1 Suzhou Agricultural Vocational College，Suzhou Jiangsu 215008； 2 Soochow University）
Abstract Some modern pharmacological research results showed that the Matrine type alkaloids in Sophora flavescens had good analgesic and anti-inflammatory effects，including Pseudo baptifoline.This paper introduced a method of extracting Pseudo baptifoline from Sophora flavescens，the results showed that the purity of Pseudo baptifoline collected was greater than or equal to 95%.
Key words Sophora flavescens；Pseudo baptifoline；extraction
苦參为豆科苦参属的植物，分布于俄罗斯、日本、印度、朝鲜以及中国大陆的南北各省区等地，生长于海拔1 500 m的地区，多生在山坡、沙地、草坡、灌木林中及田野附近，目前尚未由人工引种栽培[1-2]。主治清热燥湿、杀虫、利尿，可用于热痢、便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤瘙痒、疥癣麻风、滴虫性阴道炎[3-8]的治疗。目前，苦参的使用仅仅局限于单纯的切片入药，或者提取物入药，经济价值不高。
根据已有研究得知，赝靛叶碱为强抗菌剂和免疫促进剂，尤其对上呼吸道感染（如扁桃体炎和咽炎）有效，并且对胸部感染、胃肠道和皮肤感染有作用。据前期各地品质采样试验证明，苦参随产地的不同而含有不同含量的赝靛叶碱（一般为0.01‰～1.00‰，极少数品种能达到1‰）。因此，提供从苦参中高效提取赝靛叶碱的方法将具有重要的经济和环境效益。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试材料为苦参。
主要仪器有安捷伦1260高效液相色谱，包括四元梯度泵、全波长检测器、自动进样器和液相色谱三维工作站，数据采集和处理由液相色谱三维工作站软件完成。
主要试剂乙醇为工业纯，其他提取过程中使用的均为化学纯，色谱分析使用的均为色谱纯。标准品购于中国药品生物制品检定所，超纯水由MilliQ超纯水仪产生。
1.2 试验方法
1.2.1 赝靛叶碱的提取纯化。①用体积分数70%的乙醇对苦参进行提取，浓缩提取液，干燥，得粗提物；②用石油醚对步骤①中所得粗提物进行脱脂处理，真空减压回收溶剂，得到流体状物质，40 ℃以下真空干燥；③将步骤②所得浸膏加入pH值为2的盐酸水溶液（1 g浸膏用20 mL的酸水溶解）；④用酸水溶液的2倍二氯甲烷萃取，萃取4次；⑤水层继续用氨水碱化至pH值=10，2倍体积二氯甲烷萃取4次；⑥合并二氯甲烷萃取液，减压回收溶剂，得到粗品；⑦将步骤⑥所得粗品用乙醇-水溶液溶解，制成混浊度低于0.5°的上样溶液，采用大孔树脂D101分离柱，湿法上样以后，静置，至树脂达到吸附平衡，以乙醇-水溶液为洗脱液，进行梯度洗脱或等度分段洗脱，收集赝靛叶碱质量分数大于40%的洗脱液，合并，浓缩，干燥，得半成品；⑧对步骤⑦所得半成品重复步骤⑦的提纯，收集赝靛叶碱质量分数≥95%的洗脱液，合并，浓缩，干燥，即得所述赝靛叶碱。
1.2.2 LC/DAD分析。采用LC/DAD法对苦参化学成分进行分析并对赝靛叶碱进行含量检测。
色谱柱：C18色谱柱（C18，150 mm×3.9 mm，5 μm）；保护柱：Phenomenex Security Guard（20 mm×4.0 mm）；柱温40 ℃；进样量10 μL；流速1 mL/min；流动相在使用前使用超声脱气15 min，并使用0.22 μm 微孔滤膜过滤；流速0.2 mL/min；检测波长范围为190～400 nm。样品进样量如未特别注明均为10 μL。
2 结果与分析
通过对苦参的提取、浓缩、干燥，得到高纯度赝靛叶碱晶体，如图1所示，保留时间为6.7 min。
3 结论与讨论
综上所述，本文介绍的方法能够从苦参中高效分离赝靛叶碱，操作简单，成本低廉，适合大规模生产，具有应用潜力。
4 参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：188-189.
[2] 陈大为，王宝玲.神农本草经图鉴[M].天津：天津科学技术出版社，2009：246-247.
[3] 吴智慧，黄绳武，胡锡波.苦参生物碱的药理研究进展[J].中南药学，2006，4（5）：380-382.
[4] 刘雪花.苦参生物碱的药理研究进展[J].中国实用医药，2009，4（14）：232-234.
[5] 周岚，李贵森.苦参生物碱的研究进展[J].黑龙江科技信息，2012（4）：51.
[6] 宋雷.腺苷蛋氨酸联合苦参碱注射液治疗婴儿巨细胞病毒性肝炎57例[J].中国药业，2014，23（15）：116-118.
[7] 李太平.腺苷蛋氨酸联合苦参碱治疗病毒性肝炎高胆红素血症疗效[J].临床荟萃，2015，30（1）：108-110.
[8] 吴世星，吕晓强，杨丽.苦参有效成分镇痛作用的研究进展[J].辽宁中医杂志，2015，42（3）：653-655.
关键词 苦参；赝靛叶碱；提取
中图分类号 R284.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）20-0252-01
Method for Extracting Pseudo baptifoline from Sophora flavescens
YU Yan 1 WANG Hai-bo 2 *
（1 Suzhou Agricultural Vocational College，Suzhou Jiangsu 215008； 2 Soochow University）
Abstract Some modern pharmacological research results showed that the Matrine type alkaloids in Sophora flavescens had good analgesic and anti-inflammatory effects，including Pseudo baptifoline.This paper introduced a method of extracting Pseudo baptifoline from Sophora flavescens，the results showed that the purity of Pseudo baptifoline collected was greater than or equal to 95%.
Key words Sophora flavescens；Pseudo baptifoline；extraction
苦參为豆科苦参属的植物，分布于俄罗斯、日本、印度、朝鲜以及中国大陆的南北各省区等地，生长于海拔1 500 m的地区，多生在山坡、沙地、草坡、灌木林中及田野附近，目前尚未由人工引种栽培[1-2]。主治清热燥湿、杀虫、利尿，可用于热痢、便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤瘙痒、疥癣麻风、滴虫性阴道炎[3-8]的治疗。目前，苦参的使用仅仅局限于单纯的切片入药，或者提取物入药，经济价值不高。
根据已有研究得知，赝靛叶碱为强抗菌剂和免疫促进剂，尤其对上呼吸道感染（如扁桃体炎和咽炎）有效，并且对胸部感染、胃肠道和皮肤感染有作用。据前期各地品质采样试验证明，苦参随产地的不同而含有不同含量的赝靛叶碱（一般为0.01‰～1.00‰，极少数品种能达到1‰）。因此，提供从苦参中高效提取赝靛叶碱的方法将具有重要的经济和环境效益。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试材料为苦参。
主要仪器有安捷伦1260高效液相色谱，包括四元梯度泵、全波长检测器、自动进样器和液相色谱三维工作站，数据采集和处理由液相色谱三维工作站软件完成。
主要试剂乙醇为工业纯，其他提取过程中使用的均为化学纯，色谱分析使用的均为色谱纯。标准品购于中国药品生物制品检定所，超纯水由MilliQ超纯水仪产生。
1.2 试验方法
1.2.1 赝靛叶碱的提取纯化。①用体积分数70%的乙醇对苦参进行提取，浓缩提取液，干燥，得粗提物；②用石油醚对步骤①中所得粗提物进行脱脂处理，真空减压回收溶剂，得到流体状物质，40 ℃以下真空干燥；③将步骤②所得浸膏加入pH值为2的盐酸水溶液（1 g浸膏用20 mL的酸水溶解）；④用酸水溶液的2倍二氯甲烷萃取，萃取4次；⑤水层继续用氨水碱化至pH值=10，2倍体积二氯甲烷萃取4次；⑥合并二氯甲烷萃取液，减压回收溶剂，得到粗品；⑦将步骤⑥所得粗品用乙醇-水溶液溶解，制成混浊度低于0.5°的上样溶液，采用大孔树脂D101分离柱，湿法上样以后，静置，至树脂达到吸附平衡，以乙醇-水溶液为洗脱液，进行梯度洗脱或等度分段洗脱，收集赝靛叶碱质量分数大于40%的洗脱液，合并，浓缩，干燥，得半成品；⑧对步骤⑦所得半成品重复步骤⑦的提纯，收集赝靛叶碱质量分数≥95%的洗脱液，合并，浓缩，干燥，即得所述赝靛叶碱。
1.2.2 LC/DAD分析。采用LC/DAD法对苦参化学成分进行分析并对赝靛叶碱进行含量检测。
色谱柱：C18色谱柱（C18，150 mm×3.9 mm，5 μm）；保护柱：Phenomenex Security Guard（20 mm×4.0 mm）；柱温40 ℃；进样量10 μL；流速1 mL/min；流动相在使用前使用超声脱气15 min，并使用0.22 μm 微孔滤膜过滤；流速0.2 mL/min；检测波长范围为190～400 nm。样品进样量如未特别注明均为10 μL。
2 结果与分析
通过对苦参的提取、浓缩、干燥，得到高纯度赝靛叶碱晶体，如图1所示，保留时间为6.7 min。
3 结论与讨论
综上所述，本文介绍的方法能够从苦参中高效分离赝靛叶碱，操作简单，成本低廉，适合大规模生产，具有应用潜力。
4 参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：188-189.
[2] 陈大为，王宝玲.神农本草经图鉴[M].天津：天津科学技术出版社，2009：246-247.
[3] 吴智慧，黄绳武，胡锡波.苦参生物碱的药理研究进展[J].中南药学，2006，4（5）：380-382.
[4] 刘雪花.苦参生物碱的药理研究进展[J].中国实用医药，2009，4（14）：232-234.
[5] 周岚，李贵森.苦参生物碱的研究进展[J].黑龙江科技信息，2012（4）：51.
[6] 宋雷.腺苷蛋氨酸联合苦参碱注射液治疗婴儿巨细胞病毒性肝炎57例[J].中国药业，2014，23（15）：116-118.
[7] 李太平.腺苷蛋氨酸联合苦参碱治疗病毒性肝炎高胆红素血症疗效[J].临床荟萃，2015，30（1）：108-110.
[8] 吴世星，吕晓强，杨丽.苦参有效成分镇痛作用的研究进展[J].辽宁中医杂志，2015，42（3）：653-655.