论文部分内容阅读
采用差速离心的方法纯化感染草鱼出血病病毒的细胞悬液。提纯的病毒粒子经蛋白酶K处理和酚氯仿抽提,在1%琼脂糖凝胶电泳条件下分离得到11条dsRNA,利用柱离心式胶回收试剂盒纯化各基因片段。纯化的dsRNA溶于90%的DMSO中,70℃变性15min,然后采用随机引物法反转录合成各基因片段的cDNA,并平头连接于pZErO2.0载体的EcoRV位点,电转化TOP10感受态细胞。重组质粒经酶切、PCR扩增得到大小不等的插入片段,cDNARNA斑点杂交的结果进一步证实其插入为目的基因片段。采用循环PCR测序的