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目的 构建Cathepsin K(CTSK)基因慢病毒表达质粒,为进一步研究Cathepsin K在人软骨细胞体外老化过程中的作用奠定基础.方法 采用RT-PCR技术扩增Cathepsin K基因的蛋白翻译区,通过连接、转化等分子生物学技术,将该基因克隆至慢病毒pLenti6-V5载体上,经BamH I、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序.结果 从软骨细胞中成功地克隆出990bp的Cathepsin K基因,并经酶切分析得到6.964Kb和1.005Kb大小的两片断,测序结果显示接头两端序列正确.结论 通过基因克隆方法成功构建了Cathepsin K基因表达质粒,可用于进一步的病毒包装,为深入研究该基因对软骨细胞老化的影响奠定了基础.