目的 观察DJ-1癌基因在肾纤维化过程中表达水平、细胞内定位及高表达DJ-1基因对人肾小管上皮细胞E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达和β连环素(β-catenin)酪氨酸磷酸化水平的影响.方法 体外实验以人肾小管上皮细胞为研究对象,10μg/L TGF-β1刺激72 h诱导人肾小管上皮细胞转分化;Western印迹法检测正常组和TGF-β1干预组细胞内E-cadherin、vimentin和DJ-1蛋白表达;RT-PCR法检测两组细胞内DJ-1mRNA表达水平;应用激光共聚焦显微镜观察DJ-1在细胞内的定位.体内实验以SD大鼠为研究对象,5/6肾切除法制作慢性肾纤维化模型;常规检测BUN和Scr水平;Masson染色检测肾组织纤维化水平;免疫组化法检测肾组织内DJ-I蛋白的表达和分布.脂质体法介导含野生型DJ-1基因的重组真核表达质粒pEGFP-N1-DJ-1或空载体转染人肾小管上皮细胞,倒置荧光显微镜和Western印迹法鉴定转染效率后,Western印迹法检测正常组、pEGFP-N1-DJ-1转染组和空载体转染组细胞内E-cadherin、vimentin蛋白的表达及各组β-catenin酪氨酸磷酸化水平.结果 正常组细胞表达E-cadherin和DJ-1,几乎不表达vimentin;TGF-β1干预组细胞表达vimentin,表达较少E-cadherin,DJ-1 mRNA和蛋白表达均较正常组细胞显著增多(P<0.05).DJ-1在正常细胞内大多分布在细胞质,部分分布在细胞核;在转分化细胞内胞质和胞核内表达均有增加,且胞核内增加更显著.假手术组大鼠肾功能正常,肾组织内未见纤维组织,DJ-1主要表达于肾小管,肾小球内几乎没有表达.模型组大鼠肾功能不全,肾组织内可见明显纤维化结构,肾小管内DJ-1表达明显增加.pEGFP-N1-DJ-1转染组较正常组和空载体转染组细胞内DJ-1和vimentin蛋白表达明显增加且β-catenin酪氨酸磷酸化水平升高,而E-cadhefin蛋白表达减少.结论 DJ-1基因高表达可能促进了肾间质纤维化。
DJ-1癌基因在肾间质纤维化中表达的实验研究
【摘 要】
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目的 观察DJ-1癌基因在肾纤维化过程中表达水平、细胞内定位及高表达DJ-1基因对人肾小管上皮细胞E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达和β连环素(β-catenin)酪氨酸磷酸化水平的影响.方法 体外实验以人肾小管上皮细胞为研究对象,10μg/L TGF-β1刺激72 h诱导人肾小管上皮细胞转分化;Western印迹法检测正常组和TGF-β1干预组细胞内E-ca
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科,430030,
【出 处】
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中华肾脏病杂志
【发表日期】
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2009年25期
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