【摘 要】
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为优化建立农杆菌介导的油菜黑胫病菌遗传转化技术体系,以携带潮霉素磷酸转移酶基因的pCH-sGFP为载体,农杆菌LBA4404为介体,对油菜黑胫病菌的分生孢子进行转化.油菜黑胫病菌
【机 构】
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内蒙古自治区农牧业科学院植物保护研究所,内蒙古呼和浩特,010031;内蒙古大学生命科学学院,内蒙古呼和浩特,010021
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为优化建立农杆菌介导的油菜黑胫病菌遗传转化技术体系,以携带潮霉素磷酸转移酶基因的pCH-sGFP为载体,农杆菌LBA4404为介体,对油菜黑胫病菌的分生孢子进行转化.油菜黑胫病菌的最佳转化体系为:分生孢子浓度106个/mL,农杆菌OD600值0.6,乙酰丁香酮浓度200μmol/mL,pH 5.8,25℃,共培养4 d,获得120～161个转化子.随机选取26个转化子连续培养5代能够稳定遗传,绿色荧光蛋白基因gfp表达的菌丝和孢子可见绿色荧光.PCR鉴定发现T-DNA已整合进油菜黑胫病菌基因组中,Southern blot鉴定发现T-DNA以单拷贝的形式插入黑胫病菌中,转化子均能够稳定遗传.建立油菜黑胫病菌遗传转化体系为该病菌的致病机制研究和功能基因分析奠定了基础.
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