BMSCs条件培养液诱导小胶质细胞分泌精氨酸酶1的初步研究

• 作 者: 陈云慧 余曙光 吴巧凤 唐勇 姜岑 庄志奇 赵娜
• 机 构: 成都中医药大学基础医学院; 成都中医药大学针灸推拿学院
• 出 处: 中国修复重建外科杂志
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: BMSCs 小胶质细胞 精氨酸酶1 大鼠
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目(81603537、81704160);中国博士后科学基金(2017M612928);四川省科技厅国际科技合作与交流项目(2017HH0004);四川省教育厅项目(17ZA0163)~~

目的初步探讨BMSCs条件培养液对小胶质细胞(microglia,MGs)激活及其分泌精氨酸酶1(arginase 1,Arg1)的影响。方法取4周龄SD大鼠股骨和胫骨骨髓,采用差速贴壁法分离培养原代BMSCs,行Vimentin免疫荧光染色鉴定。取新生3日内SD大鼠全脑,采用胰蛋白酶消化法分离培养原代MGs,行Iba1免疫荧光染色鉴定。收集对数生长期BMSCs培养液制备BMSCs条件培养液,取原代MGs,分别使用含BMSCs条件培养液的DMEM/F12培养基(实验组)和普通DMEM/F12培养基(对照组)培养。培养48 h后采用倒置相差显微镜观察MGs的形态改变;Iba1免疫荧光染色观察MGs激活状态;Iba1和Arg1免疫荧光双标染色及Western blot检测MGs中Arg1的表达。结果倒置相差显微镜观察示BMSCs约14 d进入对数生长期,Vimentin免疫荧光染色结果示98%以上细胞呈阳性反应;MGs约21 d进入对数生长期,Iba1免疫荧光染色结果示约80%细胞呈阳性反应。倒置相差显微镜观察示实验组MGs被激活,激活后的MGs胞体增大、突起变短、呈阿米巴样变化。免疫荧光染色示实验组Iba1阳性细胞显著多于对照组,比较差异有统计学意义(t=0.007,P=0.000);免疫荧光双标染色示实验组Iba1和Arg1双阳性细胞显著多于对照组,比较差异有统计学意义(t=0.007,P=0.000);Western blot示实验组Arg1蛋白相对表达量显著高于对照组,比较差异有统计学意义(t=0.001,P=0.000)。结论 BMSCs条件培养液可激活MGs,并促进MGs表达Arg1。