pcDNA3．1（＋）-ABCG2真核表达载体的构建与鉴定

• 作 者: 罗维欢 江春平 丁义涛
• 机 构: 南京大学医学院,南京大学附属鼓楼医院肝胆外科
• 出 处: 肝胆外科杂志
• 发表日期: 2013年2期
• 关键词: 真核表达载体 ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞 ABCG2 Eukaryotic expression vector The negative ABCG
• 基金项目: 江苏省南京市卫生局科技发展基金资助项目（项目编号：ZKX08025）,卫生部科研课题（江苏省）（项目编号：LW201008）.

目的构建人的ABCG2基因真核表达载体pcDNA3．1（＋）-ABCG2，并在ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中表达。方法以人的癌细胞为材料提取RNA，经反转录得到cDNA，利用PCR方法，根据人ABCG2基因62526032（NM_004827．2）序列信息设计引物，扩增ABCG2基因的CDS序列，将其克隆到pcDNA3．1＋表达载体中。酶切及测序鉴定重组质粒正确后，脂质体介导转染至ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中。采用Western blot法检测外源基因ABCG2的表达。结果PCR扩增